Zakaj je povečava oljne leče večja od povečave običajne objektivne leče?
Razlogi, zakaj je treba bakterije pred barvanjem v mikrobioloških poskusih fiksirati:
1: Uničite celice in olajšajte barvanje barvila.
Drugo: poskrbite, da se bakterije prilepijo na stekelce in jih voda ne spere zlahka.
Pri fiksiranju sušimo počasi. Če želite proces res pospešiti, ga lahko nekajkrat posušite na razdalji nad plamenom alkoholne svetilke. Stekla ne sušite tako, da se segreje, sicer lahko uniči življenjsko obliko bakterij.
Barvanje po Gramu in mikroskopsko opazovanje bakterij
Eksperimentalni princip
Princip barvanja po Gramu: Različne reakcije bakterij na barvanje po Gramu so posledica različne sestave in strukture njihovih celičnih sten. Celična stena gram-pozitivnih bakterij je v glavnem mreža peptidoglikanov. Pri obdelavi z etanolom se velikost por mrežne strukture zaradi dehidracije zmanjša, prepustnost pa se zmanjša, kar povzroči nastanek kompleksa kristalna vijolična-jod. Snov se ne eluira zlahka in ostane v celicah. Po razbarvanju in kontrabarvanju se še vedno ohrani modro-vijolična barva primarnega barvila. Plast peptidoglikana celične stene gramnegativnih bakterij je tanka in ima visoko vsebnost lipidov. Zato se med razbarvanjem lipidi raztopijo z etanolom (ali acetonom) in prepustnost celične stene se poveča, zaradi česar se kristalno vijolično-jodni kompleks razmeroma enostavno eluira. Po kontrastnem barvanju s kontrabarvom se celice obarvajo z rdečo barvo kontrabarva. Princip mikroskopskega slikanja: Sodobni običajni optični mikroskopi za povečavo slik uporabljajo dva sistema leč, okularja in leče objektiva, zato jih pogosto imenujemo sestavljeni mikroskopi. V optičnem sistemu mikroskopa je zmogljivost leče objektiva najbolj kritična. Oljna leča ima največjo povečavo in je najpomembnejša za mikrobiološke raziskave. Glavni namen dodajanja kapljic olja za leče med objektno stekelce in lečo je povečati svetlost osvetlitve in povečati ločljivost mikroskopa. Uporaba olja namesto zraka kot medija za širjenje svetlobe zmanjša lom ali popolni odboj svetlobe, zaradi česar je opazovana slika jasnejša.
Poiščite bakterijske kolonije, ki jih opazujete pod mikroskopom z majhno povečavo (nadaljujte s premikanjem stekelca, če začutite rdečo senco, takoj ustavite, prilagodite povečavo, če ni kolonije, nadaljujte z ogledom), dvignite tulec leče , nato pa preklopite na oljno lečo. Dodajte kapljico cedrovega olja na območje vzorca in uporabite grobo nastavitev, da previdno spustite ohišje leče, tako da bo oljna leča potopljena v olje za leče in skoraj v stiku z vzorcem. Dvignite kondenzor v najvišji položaj in odprite odprtino. Uporabite grobo nastavitev, da počasi dvignete ohišje leče, dokler se slika predmeta ne prikaže v vidnem polju, in uporabite fino nastavitev, da bo jasna in izostrena.
