Pokončni biofluorescenčni mikroskop
Načelo fluorescentne mikroskopije je, da uporabite visoko učinkovit vir svetlobe točk (na primer ultra visok tlačni živosrebrni svetilk), da oddaja določeno valovno dolžino svetlobe (na primer ultravijolična svetloba 3650 λ ali vijolična modra svetloba 4200 λ) skozi barvno filtrirno sistem kot vzbujevalno svetlobo. Nato ga filtriramo z blokirnim (ali zatiranjem) filtrom za objektivnim objektivom in ga opazimo s povečanjem učinka okularstva.
Blokirni filter ima dve funkciji: prvič, absorbira in blokira vzbujevalno svetlobo, da vstopi v okular, da se izogne motenju fluorescence in poškoduje oči; Drugi je, da izberete in omogočite specifično fluorescenco skozi, kar kaže na specifično fluorescentno barvo.
Fluorescentne mikroskope lahko razdelimo na dve vrsti glede na načelo svetlobne poti:
1. fluorescenčni mikroskop prenosa
Starejši fluorescenčni mikroskopi uporabljajo v središču pozornosti za vzbujanje fluorescence s prenašanjem vzbujevalnega vira svetlobe skozi vzorčni material. Njegova prednost je močna fluorescenca pri majhni povečavi, vendar je njegova pomanjkljivost, da se njegova fluorescenca zmanjšuje s povečanjem povečave. Zato je primeren le za opazovanje večjih vzorčnih materialov.
2. Padajoči svetlobni fluorescenčni mikroskop
Svetloba vzbujanja pade z objektivne leče na površino vzorca, pri čemer uporablja isto objektivno lečo kot kondenzator osvetlitve in objektivna leča za zbiranje fluorescence.
Na optično pot je treba dodati dvojni barvni snop (dihroično ogledalo), ki tvori 45 -stopinjski kot z optično os. Svetloba vzbujanja se odraža v objektivni leči in se osredotoča na vzorec. Fluorescenca, ki nastane z vzorcem, in vzbujevalna svetloba, ki se odraža s površine objektivne leče in pokrovnega stekla, hkrati vstopite v objektivno lečo in se vrnete na dvojno barvno cepilnik, da ločimo vzbujevalno svetlobo in fluorescenco. Preostala vzbujevalna luč se nato blokira absorpcija filtra. Če se uporabljajo različne kombinacije vzbujevalnih filtrov, dvojnih barvnih ločevalcev in blokirnih filtrov, lahko zadovoljijo potrebe različnih fluorescentnih reakcijskih produktov.
Prednosti tega fluorescenčnega mikroskopa so enakomerna osvetlitev polja, jasno slikanje in močnejša fluorescenca z večjo povečavo.
