Dve pogosto uporabljeni metodi mikroskopskega opazovanja
1, Opazovanje temnega polja
Temno vidno polje je pravzaprav osvetlitev temnega polja. Njegove značilnosti so drugačne od svetlega vidnega polja, saj ne opazuje neposredno svetleče svetlobe, temveč opazuje odbito ali uklonjeno svetlobo predmeta, ki ga pregledujemo. Zato vidno polje postane temno ozadje, medtem ko predmet, ki ga pregledujemo, predstavlja svetlo sliko.
Načelo temnega polja temelji na optičnem Tyndallovem pojavu, kjer človeško oko ne more opaziti prašnih delcev, ko so izpostavljeni močni svetlobi zaradi uklona, ki ga povzroči močna svetloba. Če je svetloba nanjo projicirana poševno, se zdi, da se delci zaradi odboja svetlobe povečajo v prostornini, zaradi česar so vidni človeškemu očesu.
Poseben pripomoček, ki je potreben za opazovanje v temnem polju, je temnopoljski reflektor. Njegova značilnost je, da svetlobnemu snopu ne prehaja skozi predmet od spodaj navzgor, temveč spremeni pot svetlobe tako, da je usmerjena poševno proti objektu, tako da osvetljevalna svetloba ne vstopa direktno v objektiv objektiva, temveč uporablja svetlo sliko, ki jo tvori odboj ali uklon svetlobe na površini predmeta, ki ga pregledujemo. Ločljivost opazovanja v temnem polju je veliko večja. kot pri opazovanju svetlega polja, ki doseže do 0,02-0,004
2, metoda pregleda faznega kontrasta ogledala
Uspešna iznajdba faznokontrastne mikroskopije pri razvoju optičnih mikroskopov je pomemben dosežek v sodobni mikroskopski tehnologiji. Vemo, da človeško oko lahko razlikuje le valovno dolžino (barvo) in amplitudo (svetlost) svetlobnih valov. Pri brezbarvnih in prozornih bioloških vzorcih se pri prehodu svetlobe valovna dolžina in amplituda ne spremenita veliko, zato je vzorec težko opazovati v svetlem polju
Mikroskop s faznim kontrastom uporablja razliko v dolžini optične poti pregledanega predmeta za zrcalni pregled in učinkovito izkorišča interferenčni pojav svetlobe za pretvorbo fazne razlike, ki je človeško oko ne more razločiti, v razločljivo razliko amplitude. Tudi brezbarvne in prozorne snovi lahko postanejo jasno vidne. To močno olajša opazovanje živih celic, zato se fazno kontrastna mikroskopija pogosto uporablja v invertnih mikroskopih.
Osnovno načelo mikroskopije s faznim kontrastom je pretvorba razlike optične poti vidne svetlobe, ki prehaja skozi vzorec, v razliko amplitude, s čimer se izboljša kontrast med različnimi strukturami in postanejo jasne in vidne. Po prehodu skozi vzorec se svetloba lomi, odstopa od prvotne optične poti in zakasni za 1/4 λ (valovna dolžina). Če se razlika optične poti poveča ali zmanjša za drugo 1/4 λ, postane razlika optične poti 1/2 λ in interferenca med obema svetlobnima žarkoma se po združitvi osi poveča ali zmanjša, kar izboljša kontrast Kar zadeva strukturo, imajo mikroskopi s faznim kontrastom dva
posebne razlike od običajnih optičnih mikroskopov:
1. Obročasta diafragma se nahaja med svetlobnim virom in kondenzorjem, njena funkcija pa je, da tvori votel stožec svetlobe, ki prehaja skozi kondenzor in se osredotoči na vzorec
2. Kotna fazna plošča: objektivu je dodana fazna plošča, prevlečena z magnezijevim fluoridom, ki lahko zakasni fazo direktne ali difraktirane svetlobe za 1/4 λ. Lahko ga razdelimo na dve vrsti:
(1) . A+fazna plošča: zamaknite neposredno svetlobo za 1/4 λ in po združitvi osi dodajte dva niza svetlobnih valov. Amplituda se poveča in struktura vzorca postane svetlejša od okolice, kar tvori svetel kontrast (ali negativni kontrast)
(2) . B+fazna plošča: zakasnitev difraktirane svetlobe za 1/4 λ in odštevanje svetlobnih valov po združitvi osi dveh nizov svetlobnih žarkov, kar povzroči zmanjšanje amplitude in oblikovanje temnega kontrasta (ali pozitivnega kontrasta). Struktura postane temnejša od okolice
