Posebna struktura fluorescenčnega mikroskopa vključuje:
(I) Sistem barvnih filtrov
Barvni filter je pomemben del fluorescenčnega mikroskopa, njegove glavne komponente pa so filter vzbujalne svetlobe (prvi pregradni filter), emisijski svetlobni filter (drugi pregradni filter) ter polprosojna in polprotifilterska sestava (zrcalo, ki deli žarek). . Različni proizvajalci modelov barvnih filtrov, ime pogosto ni enotno.
1. Filter vzbujalne svetlobe in filter emisijske svetlobe: glede na vir svetlobe in značilnosti fluorokroma običajno izberite naslednje tri vrste ujemanja, da zagotovite določeno območje valovne dolžine vzbujalne svetlobe in naredite vzorec vzbujanja fluorescence skozi okularja na sliko.
UV vzbujanje: Filter vzbujalne svetlobe omogoča prenos UV svetlobe in blokira prehod vidne svetlobe nad 400 nm. Ustrezen emisijski filter omogoča prehod modre svetlobe, ki je v vidnem polju videti modra, npr. pri barvanju DAPI.
Vzbujanje modre svetlobe: Filter vzbujalne svetlobe omogoča prehajanje modre svetlobe in blokira druge valovne dolžine svetlobe. Ustrezen emisijski filter omogoča prehod zelene svetlobe, npr. za markerje za barvanje GFP.
Zeleno vzbujanje: Vzbujevalni filter omogoča prehod zelene svetlobe, ki blokira druge valovne dolžine. Ustrezen emisijski filter običajno prepušča rdečo svetlobo, npr. obarvanje z rodaminom.
2. Polprosojni in polodbojni filter: njegova vloga je, da popolnoma blokira vzbujanje svetlobe z odbojem; in skozi ustrezno območje valovnih dolžin oddane svetlobe. Njegov model in vzbujanje svetlobnih filtrov ter emisija svetlobnih filtrov ustrezata.
(B) objektiv in okular
Uporabite lahko različne leče objektiva, vendar * dobra izbira je simetrična, akromatična leča objektiva, ker je njena avtofluorescenca zelo majhna in lastnosti prepustnosti svetlobe (razpon valovnih dolžin) primerne za fluorescenco. Ker je fluorescenčna svetlost slike v vidnem polju mikroskopa sorazmerna s kvadratom ustne hitrosti objektiva in obratno sorazmerna z njegovo povečavo, bi moral objektiv z veliko ustno hitrostjo izboljšati svetlost fluorescenčne slike. uporabiti. Zlasti za fluorescenco, ki ni dovolj močna vzorci, je treba uporabiti visoko stopnjo ust, visoko prepustnost svetlobe objektiva, s čim nižjo z okularjem.
(C) druge optične naprave
Reflektor, njegova odsevna plast je na splošno prevlečena z aluminijem, ker aluminij na ultravijolični in vidni svetlobi absorbira modro-vijolično območje manj, odseva do 90% ali več (medtem ko je odbojnost srebra le 70%). Običajno se uporabljajo ploščati reflektorji. Zrcalo za reflektorje, oblikovano in izdelano posebej za fluorescenčno mikroskopijo zrcalo za reflektorje iz kremenčevega stekla ali drugega UV-prosojnega stekla. Naprava padajoče svetlobe, ki je poleg funkcije vira prepuščene svetlobe primernejša za neprozorne in prosojne vzorce, kot so debela folija, filtrirna membrana, kolonija, tkivna kultura in drugi vzorci za neposredno opazovanje. V zadnjih letih se je razvila nova vrsta fluorescenčnega mikroskopa, ki uporablja napravo za padajočo svetlobo, imenovano padajoči fluorescenčni mikroskop.
(D) vir svetlobe
Dandanes se kot vir svetlobe uporablja 50 ali 100 W visokotlačna živosrebrna žarnica. Delo z razelektritvijo dveh elektrod, ki ga povzroči izhlapevanje živega srebra, krogla zračnega tlaka hitro naraste (ta proces običajno traja približno 5 ~ 15 minut), v procesu oddajanja svetlobnih kvantov pa je valovna dolžina sproščene svetlobe zadostna, da vzbudi vse vrste fluorescenčnih snovi, zato se za fluorescenčno mikroskopijo običajno uporablja.
Živosrebrne sijalke imajo sorazmerno kratko življenjsko dobo, običajno 200 ur, in kot odgovor na to omejitev življenjske dobe se je v zadnjih letih široko uporabljal nov fluorescenčni svetlobni vir X-Cite, ki ima dolgo življenjsko dobo žarnice 2000 ur in prilagodljivo uporabo. - predgretje ni potrebno in je pripravljen za uporabo takoj po vzetju iz škatle.
