Razlika med laserskim konfokalnim mikroskopom in tradicionalnim optičnim mikroskopom
Laserska skenirajoča konfokalna fluorescenčna mikroskopija je razmeroma napreden instrument za analizo molekularne in celične biologije, ki uporablja računalniško, lasersko in slikovno tehnologijo za pridobivanje tridimenzionalnih podatkov bioloških vzorcev. Uporablja se predvsem za opazovanje strukture živih celic in bioloških sprememb specifičnih molekul in ionov, kvantitativno analizo in kvantitativno določanje v realnem času.
Načelo laserske konfokalne mikroskopije: uporabite luknjico za osvetlitev, nameščeno za virom svetlobe, in luknjico za zaznavanje, nameščeno pred detektorjem, da realizirate osvetlitev in zaznavanje točk. Svetloba, ki jo oddaja svetlobni vir skozi luknjico za osvetlitev, je fokusirana na točko na goriščni ravnini vzorca, oddana fluorescenca iz te točke pa je prikazana na luknjici za zaznavanje, vsaka oddana svetloba zunaj te točke pa je blokirana z zaznavanjem luknjica. Luknjica za osvetlitev in luknjica za zaznavanje sta konjugirani z obsevano točko ali zaznano točko, tako da je zaznana točka konfokalna točka, ravnina, kjer se zaznana točka nahaja, pa je konfokalna ravnina.
Računalnik zaznane točke prikaže na zaslonu računalnika v obliki slikovnih točk. Za ustvarjanje celotne slike sistem skeniranja v optični poti skenira goriščno ravnino vzorca, da ustvari popolno konfokalno sliko. Dokler se mizica premika gor in dol vzdolž osi Z, se nova plast vzorca premakne v konfokalno ravnino in nova plast vzorca se prikaže na monitorju. Z neprekinjenim premikanjem osi Z lahko dobimo neprekinjene slike različnih plasti vzorca. Svetlo izrezana slika.
Razlika med tradicionalnimi svetlobnimi mikroskopi
Tradicionalni fluorescenčni mikroskopi imajo nepremostljivo pomanjkljivost: fluorescenčne strukture zunaj goriščne ravnine so zamegljene in zamegljene. Razlog je v tem, da ima večina bioloških vzorcev prekrivajoče se strukture. Če so fluorescenčno označene strukture porazdeljene na različnih ravneh in se prekrivajo, razpršeno fluorescenco od zgoraj ali pod goriščno ravnino sprejme tudi leča objektiva, ločljivost fluorescenčnega mikroskopa pa se močno izboljša. zmanjšati.
Na podlagi tradicionalnih optičnih mikroskopov laserski skenirni konfokalni mikroskopi uporabljajo lasersko svetlobo kot vir svetlobe, sprejmejo princip in napravo konjugiranega fokusiranja ter uporabljajo računalnike za izvajanje digitalne obdelave slik, opazovanje, analizo in izhod opazovanih predmetov. Vzorec je mogoče tomografsko skenirati in slikati za nedestruktivno opazovanje in analizo tridimenzionalne prostorske strukture celic. Hkrati lahko ta tehnologija z uporabo imunofluorescentnega označevanja in ionsko fluorescentnih označevalnih sond ne samo opazuje fiksne celice in tkivne dele, ampak tudi izvaja dinamično opazovanje v realnem času in zaznavanje strukture, molekul, ionov in življenjskih aktivnosti živih celic, na subcelični ravni Opazovanje fizioloških signalov, kot so Ca2 plus, pH vrednost, membranski potencial in spremembe v celični morfologiji, je postalo nova generacija močnih raziskovalnih orodij na področjih morfologije, molekularne celične biologije, nevroznanosti, farmakologije in genetike.
