Priprava in opazovanje bioloških vzorcev za elektronsko mikroskopijo
Ločljivost mikroskopa je odvisna od valovne dolžine uporabljene svetlobe, elektronski mikroskop se je začel pojavljati leta 1933 zaradi uporabe veliko krajše valovne dolžine od vidne svetlobe elektronskega žarka kot vira svetlobe, tako da je ločljivost lahko doseže kot optični mikroskop močno izboljšan. Različni viri svetlobe določajo tudi vrsto razlik med elektronskim mikroskopom in optičnim mikroskopom.
Glede na razlike v principu slikanja elektronskega žarka in vlogi vzorca na različnih načinih je bil sodobni elektronski mikroskop razvit tako, da tvori več vrst, trenutno * se običajno uporablja transmisijski elektronski mikroskop in vrstični elektronski mikroskopom, prvi je lahko v območju 1,000-1,000,000-kratne skupne povečave obsega sprememb, drugi pa je lahko v skupni povečavi { {4}},000-kratnik skupne povečave sprememb med. Ta poskus se osredotoča na pripravo vzorcev za dve vrsti mikroskopov, transmisijski elektronski mikroskop in vrstični elektronski mikroskop.
Materiali
1. Sev Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) poševno.
2. Raztopine ali reagenti Amil acetat, koncentrirana žveplova kislina, brezvodni etanol, sterilna voda, 2 % natrijeva fosfovolframova kislina (pH 6.5-8.0) vodna raztopina, 0.3% raztopina polivinil formaldehida (raztopljenega v triklorometanu), citokroma c, amonijevega acetata, plazmida pBR322.
3. Instrumenti ali drugi pripomočki Navaden optični mikroskop, bakrena mrežica, porcelanski lij, čaša, ploščata posodica, sterilna bireta, sterilna pinceta, lanceta, predmetna stekelca, ** števna plošča, vakuumski premaz, sušilnik za kritične točke in tako naprej.
Koraki delovanja
(I) Priprava vzorcev in opazovanje transmisijske elektronske mikroskopije
1. Obdelava kovinske mreže
Vzorce za optično mikroskopijo postavimo na stekelca za opazovanje. Ker pa pri transmisijski elektronski mikroskopiji elektroni ne morejo prodreti skozi stekleno ploščo, se lahko kot nosilec uporabi le mrežasti material, ki se običajno imenuje nosilna mreža. Nosilno mrežo lahko razdelimo na veliko različnih specifikacij zaradi različnih materialov in oblik, od katerih je * običajno uporabljena mreža 200-400 (število lukenj) bakrena mreža. Bakreno mrežo je treba pred uporabo obdelati, da odstranite umazanijo na njej in jo ohranite čisto, sicer bo to vplivalo na kakovost podpornega filma in jasnost fotografij vzorcev. Bakrena mreža, uporabljena v tem poskusu, je 400 mesh, ki jo je mogoče obdelati na naslednji način: najprej jo nekaj ur belite z amil acetatom, nato jo večkrat sperite z destilirano vodo in nato belite v brezvodnem etanolu za dehidracija. Če bakrena mreža po zgornji metodi še vedno ni čista, se lahko uporabi za razredčenje koncentrirane žveplove kisline (1:1), potopljene v 1 ~ 2 minutah, ali v 1% raztopini NaOH, ki jo kuhamo nekaj minut, večkrat speremo z destilirano vodo , dano v dehidracijo brezvodnega etanola, ki se uporablja.
2. Priprava nosilnega filma
Pri opazovanju vzorcev mora biti tudi nosilna mreža prekrita s plastjo nestrukturiranega, enakomernega filma, sicer bodo majhni vzorci uhajali iz lukenj v nosilni mreži; ta plast filma se običajno imenuje podporni film ali nosilni film. Podporni film mora biti prosojen za elektrone, njegova debelina pa mora biti na splošno manjša od 20 nm; pod vplivom elektronskega žarka mora imeti film tudi določeno stopnjo mehanske trdnosti, lahko ohranja stabilnost strukture in ima dobro toplotno prevodnost; poleg tega podporna mreža ne sme imeti vidne strukture pod elektronskim mikroskopom in ne sme imeti kemične reakcije z vzorcem, ki se prenaša, in ne moti opazovanja vzorca, njegova debelina pa je na splošno približno 15 nm. Nosilna folija je lahko izdelana iz plastične folije (npr. požarne bombažne folije, polietilen formaldehidne folije itd.), ogljikove folije ali kovinske folije (npr. berilijeve folije itd.). V rutinskih delovnih pogojih je mogoče zahteve izpolniti s plastično folijo, medtem ko je priprava plastične folije v požarnem bombažnem lepilnem filmu relativno enostavna, vendar trdnost ni tako močna kot polietilen formaldehidna folija.
