Priprava in opazovanje bioloških vzorcev za elektronske mikroskope
Ločljivost mikroskopa je odvisna od valovne dolžine uporabljene svetlobe. Elektronski mikroskop, ki se je pojavil leta 1933, je dosegel bistveno višjo ločljivost od optičnega mikroskopa zaradi uporabe elektronskih žarkov z valovno dolžino, veliko krajšo od vidne svetlobe kot svetlobnih virov. Različni viri svetlobe določajo tudi vrsto razlik med elektronskimi mikroskopi in optičnimi mikroskopi.
Na podlagi razlik v principih slikanja z elektronskim žarkom in načinih delovanja na vzorce so se sodobni elektronski mikroskopi razvili v številne vrste. Trenutno se najpogosteje uporabljajo transmisijski elektronski mikroskopi in vrstični elektronski mikroskopi. Prvi ima skupno povečavo, ki lahko variira med 1000-10000000-krat, medtem ko ima slednja skupno povečavo, ki lahko variira med 20-300000-krat. Ta poskus v glavnem predstavlja pripravo dveh vrst mikroskopskih vzorcev, transmisijske elektronske mikroskopije in vrstične elektronske mikroskopije.
2, Oprema
1. Sev Escherichia coli je nagnjen.
2. Raztopina ali reagent: pentil acetat, koncentrirana žveplova kislina, brezvodni etanol, sterilna voda, 2% vodna raztopina natrijevega fosfovolframata (pH 6,5-8,0), 0,3% raztopina polivinil formaldehida (raztopljenega v kloroformu), citokrom c, amonijev acetat, plazmid pBR322.
3. Instrumenti ali druga orodja vključujejo običajne optične mikroskope, bakrene mreže, porcelanaste lijake, čaše, petrijevke, sterilne kapalke, sterilne pincete, zatiče, steklena stekelca, števne plošče, stroje za vakuumsko nanašanje, sušilnike za kritične točke itd.
3, koraki delovanja
(1) Priprava in opazovanje vzorcev za transmisijsko elektronsko mikroskopijo
1. Obdelava kovinske mreže
Vzorec optičnega mikroskopa postavimo na stekelce za opazovanje. Ker pa elektroni ne morejo prodreti skozi stekleno ploščo, je v transmisijskem zrcalu mogoče kot nosilec uporabiti le mrežasti material, ki se običajno imenuje nosilna mreža. Nosilno mrežo lahko zaradi različnih materialov in oblik razdelimo na različne specifikacije, med katerimi se običajno uporablja bakrena mreža z 200-400 očesi (število lukenj). Bakreno mrežo je treba pred uporabo obdelati, da odstranite morebitno umazanijo in jo ohranite čisto, sicer bo to vplivalo na kakovost podpornega filma in jasnost fotografij vzorcev. Bakreno mrežico 400 mesh, uporabljeno v tem poskusu, je mogoče obdelati z naslednjo metodo: najprej nekaj ur namočite in lebdite s pentil acetatom, nato večkrat sperite z destilirano vodo in na koncu bakreno mrežico potopite in lebdite v brezvodnem etanolu za dehidracijo. Če bakrena mreža po zgornjih metodah še vedno ni čista, jo lahko za 1-2 minuti namočite v razredčeno koncentrirano žveplovo kislino (1:1) ali nekaj minut kuhate v 1 % raztopini NaOH, večkrat sperete z destilirano vodo in nato dehidrirate v brezvodnem etanolu za kasnejšo uporabo.
