Merjenje volumna tkivnega bloka z uporabo bioloških mikroskopov
Doslej so kriofiksacija, zamrznjeni ultra{0}}tanki rezi in-sušenje z zamrzovanjem rutinske metode za rentgensko -mikroskopijo tkiv in celic. Navedite naslednje podrobnosti o tej metodi:
Biološki mikroskop z reflektorjem lahko premika reflektor navzgor in navzdol, da doseže zmerno svetlost, zaslonko spremenljive zaslonke pa lahko tudi spremenite, da dosežete zmerno svetlost. Če je svetloba od sonca, lahko reflektor primerno dvignemo in ustrezno povečamo zaslonko spremenljive svetlobe. Če je svetloba premočna, lahko reflektor ustrezno znižamo in ustrezno zmanjšamo zaslonko križišča. Če se v tej situaciji še vedno počutite bleščeče, se lahko odločite za namestitev ustreznega filtra na nosilec pod reflektorjem. Ta hrast lahko doseže svetlost, ki vas zadovolji. Seveda lahko s prilagajanjem zgornjega in spodnjega položaja reflektorja spremenite velikost zaslonke odčitka svetlobe in izberete ustrezne filtre, kar zahteva določeno obdobje prakse in izkušenj.
Zelo pomembno vprašanje v biološki mikroskopiji je postopek vzorčenja in izolacije celic. Po liofiliziranem-sušenju in vdelavi smole (FD) je treba zamrznjene ultra-tanke odseke skrbno obdelati, da se zagotovi, da vsebina 65 elementov vsakega dela ni poškodovana med opazovanjem in analizo. Zaradi številnih korakov in visokih stroškov mikroanalize z rentgenskimi žarki je obžalovanja vredno narediti napačne sklepe, če so analizirane celice po dolgotrajni in več-stopenjski obdelavi poškodovane ali mrtve. Miokardne celice, ločene z obdelavo z želatinazo, imajo dve obliki, ena je v obliki dolge palice, druga pa je okrogla. Slednje se nanaša na odmirajoče celice, ki se med procesom ločevanja celic poškodujejo.
Vsebnost in porazdelitev elektrolitov v teh dveh vrstah celic sta pod biološkim mikroskopom zelo različni. V krožnih kardiomiocitih je Na zelo visok in K izjemno nizek, koncentracija Ca v linearnih dendritih pa je zelo visoka. Po preverjanju z drugimi analitičnimi metodami je bilo dokazano, da sta visok Na in nizek K v krožnih celicah ter visok Ca v mitohondrijih posledica poškodbe membrane med ločevanjem celic. Metoda hladne fiksacije celic in tkiv pogosto vključuje najprej gašenje in nato shranjevanje v tekočem dušiku. Fiksacija s kaljenjem je ključnega pomena za učinek konzerviranja. Žive celice ali sveža tkiva so bogata z vodo in pri gašenju se deli celic ali tkiv, ki pridejo v neposreden stik s hladilnim sredstvom (zlasti pri uporabi tekočega dušika za hlajenje), najprej najprej zamrznejo in fiksirajo ter tvorijo "lupino", ki ovira osrednji del celic, da bi se zdrobil in fiksiral. Zato pri izvajanju rentgenske mikroanalize pogosto ugotovimo, da so ledeni kristali v osrednjem delu večjih celic. Da bi preprečili to situacijo, se kot hladilno sredstvo uporablja snov s tališčem, ki je višje od tekočega dušika, vendar nižje za 806c. Teh snovi je veliko, vendar jih je enostavno dobiti in cenovno najugodnejši je koncentrirani propan (vrelišče 42,120c, tališče 187,10c, molekulska masa 44,1), ki ima tudi hitro ohlajanje. Toda njegova pomanjkljivost je, da je vnetljiv.
