Poznavanje konfokalne fluorescenčne mikroskopije
Osnovno načelo konfokalne fluorescenčne mikroskopije: za obsevanje vzorca se uporablja točkovni vir svetlobe, na goriščni ravnini pa se oblikuje dobro definirana majhna svetlobna točka. sestavljen iz razdelilnikov. Razdelilnik žarka pošlje fluorescenco neposredno v detektor. Pred virom svetlobe in detektorjem je luknjica, imenovana luknjica za osvetljevanje in luknjica za zaznavanje. Geometrijska velikost obeh je enaka, približno 100-200nm; glede na svetlobno točko na goriščni ravnini sta konjugirani, kar pomeni, da svetlobna točka prehaja skozi niz leč in se na koncu lahko istočasno izostri na luknjico za osvetlitev in luknjo za zaznavanje. Na ta način se lahko svetloba iz goriščne ravnine konvergira znotraj obsega zaznavne luknje, medtem ko je razpršena svetloba nad ali pod goriščno ravnino blokirana zunaj zaznavne luknje in je ni mogoče prikazati. Laser skenira vzorec točko za točko, fotopomnoževalna cev pa po zaznavi luknjice pridobi tudi konfokalno sliko ustrezne svetlobne točke točko za točko, ki se pretvori v digitalni signal in prenese v računalnik ter na koncu združi v jasno sliko. konfokalna slika celotne goriščne ravnine na zaslonu.
Vsaka slika goriščne ravnine je pravzaprav optični prerez vzorca in ta optični prerez ima vedno določeno debelino, znano tudi kot optični tanki prerez. Ker je jakost svetlobe v gorišču veliko večja od intenzivnosti v negoriščni točki in je svetloba negoriščne ravnine filtrirana z luknjico, je globinska ostrina konfokalnega sistema približno enaka nič, skeniranje vzdolž Z -os lahko realizira optično tomografijo, ki tvori Opazujte dvodimenzionalni optični odsek na fokusirani točki vzorca. S kombiniranjem skeniranja ravnine XY (goriščne ravnine) s skeniranjem osi Z (optične osi) je mogoče dobiti tridimenzionalno sliko vzorca s kopičenjem dvodimenzionalnih slik neprekinjenih plasti in obdelavo s posebno računalniško programsko opremo.
