Fluorescenčni mikroskopi so razvrščeni v dve vrsti glede na njihove optične poti:
1. Transmisijski fluorescenčni mikroskop: vir vzbujanja svetlobe se uporablja za vzbujanje fluorescence s prehodom skozi material vzorca skozi zbiralno lečo. Uporabijo se lahko tudi običajno uporabljeni koncentratorji temnega polja, običajni koncentratorji pa se lahko uporabljajo za nastavitev reflektorja, da preusmeri in stransko usmeri vzbujevalno svetlobo na vzorec. To je razmeroma star-fluorescenčni mikroskop. Njegova prednost je močna fluorescenca pri majhni povečavi, slabost pa je, da njegova fluorescenca pada z naraščajočo povečavo. Zato je bolje opazovati materiale večjih vzorcev.
2. Fluorescenčni mikroskop s padajočo svetlobo je nova vrsta fluorescenčnega mikroskopa, razvita v sodobnem času. Za razliko od zgoraj navedenega vzbujevalna svetloba pade od leče objektiva navzdol na površino vzorca, pri čemer se uporablja ista leča objektiva kot osvetljevalni kondenzor in leča objektiva za zbiranje fluorescence. Optični poti je treba dodati dvobarvni razdelilnik žarka, ki je 45 stopinj oddaljen od svetlega urana. Pod kotom se vzbujevalna svetloba odbije v lečo objektiva in usmeri na vzorec. Fluorescenca, ki jo ustvari vzorec, ter vzbujevalna svetloba, ki se odbije od površine leče objektiva in pokrovnega stekla, vstopijo v lečo objektiva in se vrnejo v dvobarvni razdelilnik žarka, ki loči vzbujevalno svetlobo in fluorescenco. Preostalo vzbujevalno svetlobo nato absorbira blokirni filter. Če se uporabljajo različne kombinacije vzbujevalnih filtrov/dvobarvnih ločevalnikov žarkov/blokirnih filtrov, lahko zadostijo potrebam različnih fluorescentnih reakcijskih produktov. Prednosti tega fluorescenčnega mikroskopa so enakomerna osvetlitev polja, jasna slika in močnejša fluorescenca z večjo povečavo.
(2) Navodila za uporabo fluorescenčnega mikroskopa
1. Vklopite vir svetlobe. Ultra{2}}visokotlačno živosrebrno žarnico je treba predgrevati nekaj minut, da doseže največjo svetlost.
2. Transmisijska fluorescenčna mikroskopija zahteva namestitev zahtevanega vzbujalnega filtra med izvorom žarnice in kondenzorjem ter ustreznega blokirnega filtra za lečo objektiva. Fluorescenčni mikroskop s padajočo svetlobo mora v režo optične poti vstaviti zahtevani vzbujevalni filter/dvobarvni razdelilnik žarka/blokirni filtrski blok.
3. Opazujte z-mikroskopom z nizko{1}}močjo in prilagodite središče svetlobnega vira glede na nastavitveno napravo različnih vrst fluorescenčnih mikroskopov, tako da se nahaja v središču celotne svetlobne točke.
4. Postavite preparat in ga fokusirajte za opazovanje. Med uporabo bodite pozorni: Pred namestitvijo filtra ne opazujte neposredno z očmi, da preprečite poškodbe oči; Pri opazovanju vzorcev z oljnim mikroskopom je treba uporabiti poseben nefluorescentni oljni mikroskop; Ko visokotlačno-živosrebrno žarnico izklopite, je ni mogoče takoj znova vklopiti. Ponovni zagon traja 5 minut, sicer bo nestabilen in bo vplival na življenjsko dobo živosrebrne sijalke.
(3) Opazovanje pod fluorescenčnim mikroskopom na učni ploščadi z modro vijoličnim svetlobnim filtrom je mogoče videti celice, obarvane z 0,01 % akridin oranžnim fluorescenčnim barvilom. Jedro in citoplazma sta vznemirjena, da proizvedeta dve različni barvi fluorescence (temno zeleno in oranžno rdečo).
