Osnovno delovanje fluorescenčnega mikroskopa
a. Ugasnite luči v sobi in prižgite živosrebrno žarnico mikroskopa;
b. Izberite ustrezen filter glede na fluorescein, označen z vzorcem;
c. Postavite vzorec in poiščite primerno vidno polje;
d. Če želite fotografirati, preverite, ali je barvni film nameščen v fotoaparatu;
e. Vklopite napravo za selfije, izberite ročno prestavo, običajno je hitrost fotografiranja znotraj 0.5-10 sekund;
f. Po uporabi izključite vso napajanje in zabeležite uporabo. the
Za
3. Metoda snemanja fluorescenčne slike
Fluorescenčna slika, ki jo vidi fluorescenčni mikroskop, ima tako morfološke značilnosti kot barvo in svetlost fluorescence. Pri ocenjevanju rezultatov je treba oboje združiti za celovito presojo. Rezultati se beležijo na podlagi subjektivnih kazalcev, to je vizualnega opazovanja delavcev. Kot splošno kvalitativno opažanje je načeloma zanesljivo. Z razvojem tehnologije in znanosti se objektivni indikatorji uporabljajo za beleženje rezultatov presoje v različni meri, kot so celični spektrofotometri, analizatorji slik in drugi instrumenti. Vendar je treba rezultate, ki jih zabeležijo ti instrumenti, kombinirati tudi s subjektivnimi presojami. the
Fotografija s fluorescenčnim mikroskopom je zelo potrebna za snemanje fluorescenčnih slik. Ker je fluorescenco enostavno zbledeti in oslabiti, je treba rezultate beležiti v realnem času. Metoda je v bistvu enaka kot pri navadni fotomikrografiji. Uporabiti je treba le fotoobčutljiv film visoke hitrosti. Ker ima ultravijolična svetloba močan učinek na dušenje fluorescence, kot so markerji FITC, se bo svetlost fluorescence zmanjšala za 50 odstotkov, če bo obsevana z ultravijolično svetlobo 30 s. Zato, če je hitrost osvetlitve prepočasna, fluorescentne slike ni mogoče posneti. Splošni raziskovalni fluorescenčni mikroskopi imajo polavtomatske ali popolnoma avtomatske fotomikrografske sistemske naprave. the
Za
4. Varnostni ukrepi za uporabo fluorescenčne mikroskopije
a. Delujte strogo v skladu z zahtevami tovarniških navodil za fluorescenčni mikroskop in ne spreminjajte programa po svoji volji. the
b. Pregled je treba opraviti v temnem prostoru. Ko vstopite v temnico, priključite napajalnik in prižgite ultravisokotlačno živosrebrno žarnico 5-15 minut. Ko se močna svetloba svetlobnega vira ustali, se oči popolnoma prilagodijo temnici in začnejo opazovati osebek. the
c. Da preprečite poškodbe oči zaradi ultravijoličnih žarkov, nosite zaščitna očala, ko nastavljate vir svetlobe. the
d. Čas pregleda je po možnosti 1-2 ur vsakič. Če preseže 90 minut, se bo jakost svetlobe ultravisokotlačne živosrebrne žarnice postopoma zmanjšala in fluorescenca bo oslabela; po 3-5 minutah obsevanja vzorca z ultravijolično svetlobo bo tudi fluorescenca znatno oslabljena; zato ne sme preseči največ 2-3 ur. . the
e. Življenjska doba svetlobnega vira fluorescenčnega mikroskopa je omejena, zato je treba vzorce pregledati centralno, da prihranite čas in zaščitite svetlobni vir. Ko je vreme vroče, je treba dodati ventilatorje za odvajanje toplote, nove žarnice pa je treba zabeležiti od začetka časa njihove uporabe. Če jo želite ponovno uporabiti, potem ko je žarnica ugasnila, morate počakati, da se žarnica dovolj ohladi, preden jo prižgete. Izogibajte se prižiganju svetlobnega vira večkrat na dan. the
f. Preparat opazujte takoj po barvanju, saj bo fluorescenca sčasoma postopoma oslabela. Če je vzorec shranjen v polietilenski plastični vrečki pri 4 stopinjah, se lahko čas oslabitve fluorescence odloži in prepreči izhlapevanje pritrdilnega sredstva. the
g. Standard za presojo svetlosti fluorescence: na splošno je razdeljen na štiri ravni, kar pomeni, da "-" pomeni, da fluorescence ni ali pa je šibka. "plus" pomeni, da je bila opažena le jasno vidna fluorescenca. "plus plus" pomeni, da je vidna svetla fluorescenca. "plus plus plus" pomeni vidno svetlo fluorescenco.
