Določanje mikrobne populacije - metoda neposrednega mikroskopskega štetja!
I. Zahteve glede namena
1, Za razjasnitev principa štetja hematokrita.
2, Obvladati metodo štetja mikrobov z uporabo hematokritne plošče.
II. Osnovna načela
Metoda neposrednega štetja z mikroskopom je majhna količina suspenzije vzorca, ki se testira na posebnem objektnem stekelcu z določeno površino in prostornino (znan tudi kot bakteriološki števec), pri čemer mikroskop neposredno šteje preprosto, hitro in intuitivno metodo. Trenutno so domači in tuji pogosto uporabljeni bakteriološki števci: plošča za štetje krvnih celic, bakteriološki števci Peteroff-Hauser in bakteriološki števci Hawksley itd., Ki se lahko uporabljajo za kvas, bakterije, spore plesni in druge suspenzije štetja, osnovno načelo je enako. Zadnji dve vrsti števcev imata skupno prostornino 0.02 mm3 po namestitvi pokrovnega stekelca, razdalja med pokrovnim stekelcem in nosilno rezino pa je samo 0,02 mm, zato manjše celice, kot je npr. bakterije je mogoče opazovati in prešteti z oljnim imerzijskim objektivom. Poleg uporabe teh števcev obstaja tudi metoda ocenjevanja razmerja med površino razmaza in površino vidnega polja, opazovano neposredno pod mikroskopom, ki se običajno uporablja za bakteriološke preiskave kravjega mleka. Prednosti metode štetja z neposrednim mikroskopom so intuitivna, hitra in enostavna za uporabo. Pomanjkljivost te metode pa je, da je rezultat običajno seštevek mrtvih in živih organizmov. Obstaja nekaj metod za premagovanje te pomanjkljivosti, kot je kombinacija mikrokomorne kulture, obarvane z živimi bakterijami (kratek čas) in dodajanje inhibitorjev citokineze, da se doseže namen štetja samo živih organizmov.
Koraki delovanja
1, Priprava bakterijske suspenzije
Uporabite sterilno fiziološko raztopino za pripravo bakterijske suspenzije pivskega kvasa z ustrezno koncentracijo.
2, Zrcalna štetna komora
Pred dodajanjem vzorcev je treba najprej pregledati števno komoro števne plošče. Če je umazanija, jo je treba pred štetjem očistiti in posušiti s fenom.
3, dodajanje vzorcev
Očistite in posušite ploščo za štetje krvnih celic, prekrite s pokrovnim stekelcem, nato pa s sterilno kapilarno bireto stresite suspenzijo pivskega kvasa z roba pokrovnega stekelca, da kapne majhna kapljica, tako da bakterijska tekočina vzdolž vrzeli s kapilarnim prodorom v stekelec štetna komora samodejno, običajno se lahko štetna komora napolni z bakterijsko tekočino. Pri jemanju vzorcev je treba raztopino bakterij najprej dobro pretresti; pri dodajanju vzorcev v števni komori ne sme biti zračnih mehurčkov.
4, mikroskopsko štetje
Po dodajanju vzorca ga pustite počivati 5 minut, nato ploščo za štetje krvnih celic postavite na nosilec mikroskopa, najprej poiščite lokacijo komore za štetje z majhno povečavo in jo nato spremenite na veliko povečavo za štetje. Ustrezno prilagodite intenzivnost svetlobe mikroskopa, za mikroskop z reflektorsko lučjo je treba paziti tudi na to, da svetloba ne sme biti nagnjena na eno stran, sicer vidnega polja ni enostavno jezikom jasno štetje komore mrežne črte ali vidite samo navpično ali samo vodoravno črto. Če se pred štetjem ugotovi, da je bakterijska tekočina pregosta ali preredka, je treba pred štetjem ponovno prilagoditi razredčitev. Ustrezne so splošne zahteve za razredčitev vzorca s približno 5 do 10 bakterijami v vsaki celici. Za vsako štetno komoro so za štetje izbrani organizmi v 5 srednjih predelkih (4 vogali in en srednji predelek v sredini). Organizmi, ki se nahajajo na mrežnih črtah, se običajno štejejo samo na zgornji in desni črti. V primeru brstenja kvasovk, ko brsteče telo doseže polovico velikosti matične celice, se šteje kot dva organizma. Štetje vzorca iz dveh števnih komor v povprečno vrednost za izračun vsebnosti bakterij v vzorcu.
5. Čiščenje hematokritne ploščice
Po uporabi ploščo za štetje krvnih celic sperite z vodo pod pipo, za pranje in krtačenje ne uporabljajte trdih predmetov, posušite jo sami ali jo po pranju posušite s sušilcem za lase. Mikroskopsko preglejte ploščo, da vidite, ali so v vsakem predelku kakršni koli ostanki organizmov ali druge oborine. Če ni čisto, je treba pranje ponavljati, dokler ni čisto.
