Biološki mikroskop glede volumna tkivnih blokov
Biološka mikroskopija Do sedaj so hladna fiksacija, zamrznjeni ultratanki rezi in liofilizacija rutinske metode za rentgenske mikroreze tkiv in celic. Spodaj so podrobnosti te metode:
Biološki mikroskopi. Pri mikroskopih s kondenzorjem lahko kondenzor premikate gor in dol, da dosežete zmerno svetlost. Poleg tega je mogoče spremeniti zaslonko spremenljivih svetlečih diod, da dosežete zmerno svetlost 9b. Če je svetloba močna, lahko kondenzor primerno dvignemo in zaslonko spremenljive svetlobe primerno povečamo. Če je svetloba premočna, lahko kondenzor ustrezno znižamo in ustrezno zmanjšamo aperturo prečnega svetlobnega snopa. Če se v tej situaciji še vedno počutite bleščeče, lahko izberete ustrezen filter in ga namestite na nosilec pod kondenzatorjem. Tako lahko dobite svetlost, ki vas zadovolji. Seveda je potrebno nekaj časa vaditi, da se pridobijo izkušnje pri nastavljanju gor in dol položaja kondenzorja za doseganje spremenljive velikosti zaslonke in izbiri ustreznih filtrov.
Zelo pomembno vprašanje pri biološki mikroskopiji je, da mora med postopkom zbiranja in ločevanja celic, po liofilizaciji in vdelavi smole (FD), po zamrznitvi ultratankih peletov in po liofilizaciji vsebnost 65 elementov vsakega dela analizirati zelo previdno in nikakor ne poškodovati celic, ki jih je treba analizirati. Ker rentgenska analiza mikropodročij ne vključuje samo številnih korakov, ampak tudi veliko stane. Če so po dolgem času in več korakih analizirane celice poškodovane ali odmrle celice, bi bilo škoda delati napačne sklepe. Na primer, kardiomiociti, izolirani po zdravljenju s kolagenazo, imajo dve obliki, ena je dolga paličasta in druga okrogla. Slednje so odmirajoče celice, ki se med izolacijo celic poškodujejo.
Biološka mikroskopija Vsebnost in porazdelitev elektrolitov v teh dveh vrstah celic sta zelo različni. V okroglih kardiomiocitih je Na zelo visok in K zelo nizek, koncentracija Ca v linearnih vejah pa je zelo visoka. Po preverjanju z drugimi analiznimi metodami je bilo dokazano, da sta visok Na in nizek K v okroglih celicah ter visok ca v mitohondrijih posledica poškodbe celične membrane med procesom ločevanja celic. Metoda hladne fiksacije celic in tkiv je pogosto ta, da jih najprej pogasimo in fiksiramo, nato pa shranimo v tekoči dušik. Kaljenje in fiksiranje sta zelo pomembna za učinek konzerviranja. Žive celice ali sveža tkiva so bogata z vodo. Pri kaljenju se deli celic ali tkiv, ki so v neposrednem stiku s kriogenom (predvsem pri kaljenju s tekočim dušikom), najprej zamrznejo in fiksirajo ter tako tvorijo »lupino«, ki ovira osrednji del celice zdrobljen. in hladno fiksiran. Zato se pri analizi mikroobmočij X-linije pogosto ugotovi, da so v središču večjih celic ledeni kristali. Da se to prepreči, se kot zdrobljeno hladilno sredstvo uporabi snov z višjim tališčem kot tekoči dušik, vendar nižjo suhostjo -806c. Takšnih snovi je veliko, a najlažji in najcenejši je koncentrirani propan (vrelišče - 42.120c, tališče - 187.10c, molekulska masa 44,1), hitrost ohlajanja pa je tudi najhitrejša. Toda njegova pomanjkljivost je, da je vnetljiv.
Biološki mikroskop lahko mišično vlakno postavi na poseben okvir. Ko kontrakcija mišičnega vlakna doseže določeno fazo in jo je treba popraviti, se šoba takoj zažene, da razprši tekoči propan na mišično vlakno, da ga ugasne in učvrsti. Nato smo mišična vlakna skupaj z okvirjem vzeli ven in dali v tekoči dušik. Če so krvne celice ali ločene celice fiksirane, najprej centrifugirajte pri nizki hitrosti, da koncentrirate celice, celice prenesite v majhno srebrno epruveto z dobro toplotno prevodnostjo, epruveto postavite v tekoči propan in zamrznite, da se fiksira. Pri fiksiranju podganje trebušne slinavke v Hallovem laboratoriju najprej predhodno ohladite dva jeklena bloka s tekočim helijem (ali tekočim dušikom), stisnite dva bakrena bloka s kleščami in ju postavite pred in za trebušno slinavko, da pogasite in pritrdite maternično žlezo. . Tkiva ali celice je mogoče pogasiti in fiksirati ter nato prenesti v tekoči dušik za dolgoročno shranjevanje.
