Metode priprave vzorcev za optično in elektronsko mikroskopijo filmov
Metoda mikrofilmanja na splošno vključuje štiri kategorije: metodo rezanja, metodo celotnega tesnjenja, metodo premazovanja in metodo stiskanja.
① Metoda rezine. Debelina rezine optičnega mikroskopa med 2 in 25 mikroni, splošni rastlinski in živalski materiali, primerna je rezina debeline približno 10 mikronov. Metoda razdeljevanja se razlikuje glede na različne vdelane agente. Običajno se uporabljajo parafinska metoda rezanja, metoda rezanja z bombažnim lepilom, metoda zamrznjenega rezanja in metoda glikol metakrilata (imenovana metoda GMA). Parafinska metoda rezanja vključuje korake fiksacije, vdelave, rezanja, barvanja, dehidracije in tesnjenja. Ključno je vdelati biomaterial v parafinski vosek in uporabiti parafinski vosek kot podlago za rezanje biomateriala, potopljenega v voščeni blok, na idealne tanke rezine. Postopek delovanja je naslednji: fiksacija → pranje z vodo → dehidracija alkohola z nizko do visoko koncentracijo → prosojnost ksilena → potopitev v vosek → vdelava → rezanje → krpanje → razvoskanje s ksilenom → korak za korakom od visoke do nizke koncentracije obdelava z alkoholom in končno prehod na vodo → barvanje → postopna dehidracija z nizko do visoko koncentracijo alkohola → prosojnost s ksilenom → tesnjenje s smolnim lepilom. Osnovni vključeni koraki so enaki pri vseh vrstah filmskih tehnik.
② Integralna metoda tesnjenja. Uporablja se za posamezne celice, drobne organizme ali razpršene organe metode celotnega montiranega filma. Ta metoda zahteva tudi različne korake fiksacije, barvanja, dehidracije, prosojnosti in tesnjenja. Ta metoda se uporablja za pripravo ustnega dela čipk in žuželk.
Metoda razmaza. Metoda priprave, pri kateri se biološki vzorec, ki se zlahka razprši, nanese na stekelce. Primer je krvni razmaz.
④ Metoda stiskanja. Naravna, zlahka razpršena tkiva ali zlahka razpršena tkiva po zdravljenju, kot so živalske spermatocite, celice koreninskega vrha itd., na stekelcu in pokrovno stekelce, nato pa na silo zdrobite tkiva, tako da se celice ali znotrajcelične strukture razširijo v plast načinov snemanja. Metoda stiskanja se pogosto uporablja za opazovanje kromosomov, običajno obarvanih z magenta acetatom, rdečim lišajem in rdečim s karbolno kislino.
