Merjenje mikrobne količine - mikroskopska metoda neposrednega štetja!
Za rast bakterijskih populacij je značilno povečanje števila celic ali povečanje celičnega materiala. Obstaja več metod za merjenje števila celic, vključno z neposrednim mikroskopskim štetjem, štetjem na ploščicah, turbometrijo s spektrofotometrom, najverjetnejšo številko MPN in membransko filtracijo. Metode za merjenje celične snovi vključujejo merjenje suhe teže celic, merjenje vsebnosti določenih sestavin celic, kot so dušik, RNK in DNK, ter merjenje presnovnih produktov. Če povzamemo, obstaja veliko metod za merjenje mikrobne rasti, vsaka s svojimi prednostmi in slabostmi, izbira pa mora temeljiti na posebnih zahtevah pri delu. Ta poskus v glavnem uvaja pogosto uporabljeno metodo neposrednega štetja z mikroskopom v proizvodnji in znanstvenoraziskovalnem delu.
Zahteve za namen
1. Pojasnite princip uporabe plošče za štetje krvnih celic za štetje.
2. Obvladati metodo uporabe plošče za štetje krvnih celic za štetje mikrobov.
2, Osnovna načela
Metoda mikroskopskega neposrednega štetja je preprosta, hitra in intuitivna metoda neposrednega štetja majhne količine suspenzije vzorca pod mikroskopom, tako da se ta položi na posebno stekelce z določeno površino in prostornino (znano tudi kot bakterijski števec). Trenutno pogosto uporabljene naprave za štetje bakterij doma in v tujini vključujejo plošče za štetje krvnih celic, naprave za štetje bakterij Peteroff Hauser in naprave za štetje bakterij Hawksley, ki se vse lahko uporabljajo za štetje suspenzij kvasovk, bakterij, glivičnih spor itd. z istim osnovnim principom. Zadnji dve vrsti bakterijskih števcev imata skupno prostornino {{0}}.02 mm3, potem ko sta prekrita s pokrovnim steklom, razdalja med pokrovnim steklom in nosilnim stekelcem pa je samo 0,02 mm. Zato se lahko za opazovanje in štetje manjših celic, kot so bakterije, uporabi objektiv za potop v olje. Poleg uporabe teh bakterijskih števcev obstaja tudi metoda ocenjevanja za neposredno opazovanje razmerja med površino brisa in površino polja pod mikroskopom, ki se običajno uporablja za bakteriološko preiskavo mleka. Prednosti neposrednega štetja z mikroskopom so intuitivno, hitro in enostavno upravljanje. Toda slabost te metode je, da so izmerjeni rezultati običajno seštevek mrtvih in živih celic. Trenutno obstaja nekaj metod, ki lahko odpravijo to pomanjkljivost, kot je kombiniranje komorne kulture za barvanje živih celic (kratek čas) in dodajanje zaviralcev celične delitve, da se doseže cilj samo štetja živih celic.
Uporaba plošče za štetje krvnih celic kot primer za neposredno štetje pod mikroskopom. Načine uporabe drugih dveh števcev bakterij najdete v priročnikih različnih proizvajalcev. Neposredno štetje pod mikroskopom z uporabo plošče za štetje krvnih celic je pogosto uporabljena metoda za štetje mikrobov. Števna deska je posebej izdelan steklen drsnik s štirimi utori, ki na njem tvorijo tri ploščadi; Širša ploščad v sredini je s kratkim vodoravnim utorom razdeljena na dve polovici, na vsaki strani ploščadi je mreža. Vsaka mreža je razdeljena na devet velikih mrež, velika mreža na sredini pa je soba za štetje. Struktura plošče za štetje krvnih celic je prikazana na sliki l{{0}}. Lestvica števne sobe ima na splošno dve specifikaciji. Prvi je, da je velik kvadrat razdeljen na 25 srednjih kvadratov, vsak kvadrat pa nadalje razdeljen na 16 majhnih kvadratov (slika 15-2); Druga metoda je razdelitev velikega kvadrata na 16 srednjih kvadratov, vsak kvadrat pa nadalje razdeljen na 25 majhnih kvadratov. Ne glede na velikost štetja pa je v vsakem velikem polju 400 majhnih polj. Če je stranica vsakega kvadrata 1 mm, je ploščina vsakega velikega kvadrata lmm2. Po prekrivanju s pokrovnim steklom je višina med pokrovnim steklom in stekelcem 0,1 mm, tako da je prostornina števne sobe 0,1 mm3 (ena tisočinka mililitra). Slika 15-1 Struktura plošče za štetje krvnih celic (I) Slika 15-2 Struktura plošče za štetje krvnih celic (II) A Pogled od spredaj; B. Navpični prerez; Povečana mreža ima na sredini velik kvadrat kot prostor za štetje 1. Tabla za štetje krvnih celic; 2. Pokrivno steklo; Pri štetju v števni sobi se skupno število bakterij običajno izračuna za pet kvadratov, nato se dobi povprečna vrednost vsakega kvadrata, pomnožena s 25 ali 16, da se dobi skupno število bakterij v velikem kvadratu, ki se nato pretvori v skupno število bakterij v 1 ml raztopine bakterij. Ob predpostavki, da je skupno število bakterij v petih kvadratnih mrežah A in faktor razredčitve bakterijske raztopine B. Če je v kvadratni mreži 25 števnih plošč, je skupno število bakterij v 1 ml bakterijske raztopine A/5 × 25 × 104 × B=50000A · B. Podobno, če je v kvadratni mreži 16 števnih plošč, je skupno število bakterij v 1 ml bakterijske raztopine A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
