Kako izbrati med invertnim mikroskopom in fluorescenčnim mikroskopom?
Mikroskop je pomemben instrument v celični kulturi in sorodnih eksperimentih z derivati. Trenutno so na trgu različne vrste mikroskopov in izbira mikroskopa, ki ustreza potrebam in je primeren, je izziv. Spodaj bomo predstavili principe invertnih mikroskopov in fluorescenčnih mikroskopov, med katerimi lahko vsakdo izbira.
Invertni mikroskop je tako kot običajni mikroskop v glavnem sestavljen iz treh delov: mehanskega dela, svetlobnega dela in optičnega dela. Sestava obrnjenega mikroskopa je enaka kot pri običajnem pokončnem mikroskopu, le da sta leča objektiva in sistem osvetlitve obrnjena, pri čemer je prva pod mizico, druga pa nad mizico. Ta struktura bistveno poveča efektivno razdaljo med sistemom osvetlitve reflektorjev in odrom, kar olajša namestitev debelejših orodij za opazovanje, kot so posodice za kulture in stekleničke za celične kulture (seveda se lahko uporabljajo tudi steklena stekelca), medtem ko je delovna razdalja med lečo objektiva in ni treba, da je material zelo velik. Invertni mikroskop uporabljajo medicinske in zdravstvene ustanove, univerze in raziskovalni inštituti za opazovanje mikroorganizmov, celic, bakterij, tkivnih kultur, suspenzij, sedimentov itd. Z njim lahko neprekinjeno opazujemo proces celične in bakterijske proliferacije in delitve v gojišču ter lahko zajame katero koli obliko tega procesa. Široko se uporablja na področjih, kot so citologija, parazitologija, onkologija, imunologija, genski inženiring, industrijska mikrobiologija in botanika.
Fluorescenčna mikroskopija se uporablja za preučevanje absorpcije, transporta, porazdelitve in lokalizacije snovi v celicah. Za testirani objekt obstajata dva načina za ustvarjanje fluorescence: spontana fluorescenca, ki se neposredno oddaja z ultravijoličnim obsevanjem; Sekundarna fluorescenca se pojavi, ko opazovani predmet obdelamo s fluorescentnimi barvili in izpostavimo ultravijolični svetlobi, preden oddaja fluorescenco. Nekatere snovi v celicah, kot je klorofil, proizvajajo spontano fluorescenco, potem ko so izpostavljene ultravijoličnemu sevanju; Nekatere snovi same morda ne oddajajo fluorescence, če pa jih obarvamo s fluorescenčnimi barvili ali fluorescentnimi protitelesi, lahko oddajajo tudi sekundarno fluorescenco pod ultravijoličnim sevanjem. Fluorescenčni mikroskop uporablja točkovni svetlobni vir visoke svetlobne učinkovitosti za oddajanje določene valovne dolžine svetlobe (UV 365 nm ali UV modra 420 nm) skozi sistem barvnega filtra kot vzbujevalno svetlobo, ki vzbudi fluorescentne snovi v vzorcu, da oddajajo različne barve fluorescence. Nato ga opazujemo s povečavo objektiva in okularja. Na ta način je tudi pri šibki fluorescenci zlahka prepoznaven in zelo občutljiv pod močnimi kontrastnimi ozadji. Uporablja se predvsem za preučevanje celične strukture, delovanja in kemične sestave.
Fluorescenčno mikroskopijo lahko razdelimo na dve vrsti: transmisijsko in padajočo. Prvi je bolj primitiven, drugi pa naprednejši. Osnovna konstrukcija obeh vrst fluorescenčnih mikroskopov je podobna, glavna razlika pa je v tem, da prepuščena vzbujevalna svetloba prehaja skozi vzorec in proizvaja fluorescenco kot celoto. Fluorescenca nato vstopi v lečo objektiva in večja kot je povečava, šibkejša je fluorescenca; Padajoča vzbujevalna svetloba projicira na površino vzorca in proizvaja fluorescenco, ki vstopi v lečo objektiva. Večja kot je povečava, močnejša je fluorescenca, zaradi česar je primeren za opazovanje z visoko močjo. Glavne komponente fluorescenčnega mikroskopa vključujejo svetlobni vir živosrebrne žarnice, vzbujevalno filtrirno ploščo, spektrofotometer (kapljični tip), dušilno filtrirno ploščo in kondenzator temnega polja (prepustni tip). Poleg tega je večina živosrebrnih žarnic zaradi močnega segrevanja opremljenih tudi s filtri, ki absorbirajo toploto. Nekateri fluorescenčni mikroskopi imajo tudi fazni kontrastni objektiv in krožno odprtino, kar omogoča opazovanje faznega kontrasta. Nekateri fluorescenčni mikroskopi imajo invertno strukturo, ki je tudi invertni mikroskop, itd.
Poleg tega je mogoče zgoraj omenjene mikroskope sestaviti v digitalne mikroskope z vgradnjo CCD-ja, ki fizične slike, ki jih vidi mikroskop, pretvori v digitalne analogne slike in jih slika na računalniku. Posledično lahko naše raziskave na mikro področju premaknemo s tradicionalnega binokularnega opazovanja na reprodukcijo prek zaslonov in s tem izboljšamo delovno učinkovitost.
