Izboljšanje prednosti večfotonske laserske skenirajoče mikroskopije
Večfotonska mikroskopija z laserskim skeniranjem je velik napredek v primerjavi z optično mikroskopijo. Opazuje lahko globoko strukturo živih celic, fiksnih celic in tkiv ter lahko pridobi jasne in ostre večplastne strukture ravnine Z, to je optične reze, iz katerih lahko sestavi tridimenzionalno trdno strukturo vzorca. Konfokalna mikroskopija uporablja vir laserske svetlobe, ki po ekspanziji zapolni celotno zadnjo goriščno ravnino leče objektiva, nato pa gre skozi sistem leč objektivne leče, da se konvergira v zelo majhno točko na goriščni ravnini vzorca. Odvisno od numerične odprtine leče objektiva je premer najsvetlejše svetlobne točke približno 0.25 ~ 0.8 μm, globina pa približno 0.5 ~ 1.5 μm . Velikost konfokalne točke je odvisna od zasnove mikroskopa, valovne dolžine laserja, značilnosti leče objektiva, nastavitev stanja enote za skeniranje in lastnosti vzorca. Razpon osvetlitve in globina osvetlitve poljskega mikroskopa sta velika, medtem ko je osvetlitev konfokalnega mikroskopa koncentrirana na natančno ostrenje v goriščni ravnini. Najosnovnejša prednost konfokalne mikroskopije je, da lahko izvede fino optično rezanje debelih fluorescentnih vzorcev (ki lahko dosežejo 50 μm ali več), debelina rezin pa je približno 0,5 do 1,5 μm. Serijske optične slike prerezov lahko dobite s premikanjem vzorca navzgor in navzdol z uporabo sofisticiranega koračnega motorja mikroskopa z osjo Z. Zbiranje informacij o sliki je nadzorovano v natančni ravnini, ne da bi ga motili signali, oddani z drugih lokacij na vzorcu. Po odstranitvi vpliva fluorescence ozadja in povečanju razmerja med signalom in šumom sta kontrast in ločljivost konfokalnih slik znatno izboljšana v primerjavi s tradicionalnimi fluorescenčnimi slikami, osvetljenimi s poljem. V mnogih vzorcih je veliko zapletenih strukturnih komponent prepletenih, da tvorijo zapletene sisteme, toda ko je mogoče zbrati dovolj optičnih odsekov, jih lahko s programsko opremo rekonstruiramo v treh dimenzijah. Ta eksperimentalna metoda se pogosto uporablja v bioloških raziskavah za pojasnitev kompleksnih strukturnih in funkcionalnih odnosov med celicami ali tkivi.
