Osnovna načela konfokalnih laserskih mikroskopov
Jedro konfokalne laserske mikroskopije je v "konfokalni" tehnologiji. Ta tehnologija uporablja točkovni svetlobni vir (običajno laser) in poseben optični sistem, tako da se med postopkom slikanja osvetli in posname samo vzorec v žarišču, medtem ko se področja zunaj žarišča ne upoštevajo. Ta metoda selektivne osvetlitve in zaznavanja bistveno izboljša ločljivost in kontrast slike.
1. Vir svetlobe
Konfokalni mikroskopi uporabljajo laserje kot vire svetlobe, ker imajo laserji visoko monokromatičnost, koherenco in usmerjenost. Te lastnosti omogočajo laserjem, da zagotavljajo stabilno osvetlitev in natančen nadzor ostrenja žarka.
2. Sistem razsvetljave
Sistem osvetlitve vključuje laser in skenirno napravo. Laserski žarek se hitro premika skozi napravo za skeniranje (običajno galvanometer), da doseže točkovno skeniranje vzorca. Ta metoda skeniranja omogoča, da laserski žarek oblikuje niz žarišč na vzorcu, s čimer se doseže slikanje vzorca po plasteh.
3. Konfokalna zaslonka
Med objektivom mikroskopa in vzorcem je konfokalna odprtina. Funkcija te zaslonke je omejiti globino slikanja in detektor lahko sprejme samo svetlobo, ki gre skozi to odprtino. Na ta način lahko v detektor vstopi samo svetloba v žarišču, medtem ko je svetloba zunaj žarišča blokirana.
4. Objektiv
Leča objektiva je ključna komponenta konfokalne mikroskopije, odgovorna je za fokusiranje laserja na vzorec in zbiranje svetlobe, ki se odbija ali oddaja nazaj iz vzorca. Visokokakovostne objektivne leče lahko zagotovijo-slike visoke ločljivosti.
5. Detektor
Detektor je odgovoren za sprejem svetlobe, ki prehaja skozi konfokalno odprtino, in jo pretvori v električni signal. Ti električni signali se nato obdelajo za ustvarjanje slik.
6. Obdelava slik
Neobdelani podatki, ustvarjeni s konfokalno mikroskopijo, so niz dvo{0}}dimenzionalnih slik, ki jih je treba obdelati z računalniško programsko opremo za rekonstrukcijo tri-dimenzionalnih slik. Ta postopek vključuje prekrivanje slike, izboljšavo in 3D rekonstrukcijo.
