Zakaj potrebujete konfokalni mikroskop?
1. Optični mikroskopi so s prizadevanji in izboljšavami naših velikih predhodnikov dosegli stanje popolnosti. Pravzaprav nam lahko običajni mikroskopi preprosto in hitro zagotovijo čudovite mikroskopske slike. Vendar se je zgodil dogodek, ki je prinesel revolucionarno inovacijo v ta skoraj popoln svet mikroskopije. To je bil izum "laserskega skenirajočega konfokalnega mikroskopa." Značilnost tega novega tipa mikroskopa je, da uporablja optični sistem, ki slikovno informacijo izloči samo na površini, kjer je fokus, pridobljeno informacijo pa med spreminjanjem fokusa obnovi v slikovnem pomnilniku in tako pridobi popolno 3D informacijo. Živahna podoba inteligence. S to metodo je mogoče zlahka pridobiti podatke o obliki površine, ki jih ni mogoče potrditi z običajnim mikroskopom. Poleg tega sta za običajne optične mikroskope "povečanje ločljivosti" in "poglabljanje globine fokusa" nasprotujoča si pogoja, zlasti pri velikih povečavah. Vendar pa je v konfokalni mikroskopiji ta problem enostavno rešljiv.
2. Prednosti konfokalnega optičnega sistema
Konfokalni optični sistem izvaja točkovno osvetljevanje vzorca, odbita svetloba pa uporablja tudi točkovni receptor za sprejem svetlobe. Ko je vzorec postavljen v položaj fokusa, lahko skoraj vsa odbita svetloba doseže fotoreceptor. Ko vzorec ni izostren, odbita svetloba ne more doseči fotoreceptorja. Z drugimi besedami, v konfokalnem optičnem sistemu bo prikazana samo slika, ki sovpada z žariščem, svetlobne lise in neuporabna razpršena svetloba pa bodo zaščitene.
3. Zakaj uporabljati laser?
V konfokalnem optičnem sistemu je vzorec osvetljen točkovno, odbito svetlobo pa sprejema tudi s točkovnim fotoreceptorjem. Zato so potrebni točkovni viri svetlobe. Laserji so zelo točkovni viri svetlobe. V večini primerov vir svetlobe konfokalnih mikroskopov uporablja laserske vire svetlobe. Poleg tega so značilnosti laserja, kot so monokromatičnost, usmerjenost in odlična oblika žarka, prav tako pomembni razlogi za njegovo široko uporabo.
4. Možno je opazovanje v realnem času, ki temelji na hitrem skeniranju
Za lasersko skeniranje se v horizontalni smeri uporablja akustični optični deflektor (AO element), v vertikalni smeri pa servo električno krmiljeno zrcalo za skeniranje snopa (Servo Galvano-mirror). Ker akustično-optična odklonska enota nima mehanskega vibracijskega dela, lahko skenira pri visoki hitrosti, kar omogoča opazovanje v realnem času na nadzornem zaslonu. Visoka hitrost tovrstnega slikanja je zelo pomembna postavka, ki neposredno vpliva na hitrost ostrenja in iskanja položaja.
5. Razmerje med položajem fokusa in svetlostjo
V konfokalnem optičnem sistemu je svetlost največja, ko je vzorec pravilno postavljen v položaj fokusa, njegova svetlost pa se močno zmanjša pred in za njim (polna črta na sliki 4). Ta občutljiva selektivnost goriščne ravnine je tudi načelo za določanje smeri višine in širitev globine fokusa konfokalnega mikroskopa. Nasprotno pa običajni optični mikroskop nima očitnih sprememb svetlosti pred in po položaju fokusa (črtkana črta na sliki 4).
6. Visok kontrast in visoka ločljivost
Pri navadnih optičnih mikroskopih bo odbita svetloba iz neizostrenega dela motila in se prekrivala z ostrim slikovnim delom, kar bo povzročilo zmanjšanje kontrasta slike. Nasprotno pa sta v konfokalnem optičnem sistemu razpršena svetloba zunaj žarišča in razpršena svetloba znotraj leče objektiva skoraj popolnoma odstranjeni, tako da je mogoče dobiti sliko z zelo visokim kontrastom. Poleg tega, ker gre svetloba skozi lečo objektiva dvakrat, se točkasta slika izostri, kar izboljša tudi ločljivost mikroskopa.
