Uporaba fluorescenčne mikroskopije: tehnike in spretnosti
Tehnični parametri fluorescenčnega mikroskopa 1. Širokokotni okular 2. Akromatična leča objektiva 3. Pretvornik objektiva s štirimi luknjami 4. Epifluorescenčna naprava Modri (B) Zeleni (G) vzbujevalni sistem 100W živosrebrna svetilka 5. Mehanizem za koaksialno grobo in fino nastavitev ostrenja: nastavitev Razpon ostrenja: 15 mm Vrednost mreže mikro premikanja: 0,002 mm 6. Dvoslojna mehanska miza Razpon vzdolžnega premikanja: 70 mm Razpon stranskega premikanja: 50 mm
Uporabite metodo spretnosti
(1) Predmetno steklo
Debelina stekelca mora biti med 0,8 in 1,2 mm. Predebelo stekelce bo po eni strani absorbiralo več svetlobe, po drugi strani pa vzbujevalne svetlobe ni mogoče koncentrirati na preparatu. Stekelca morajo biti gladka, enakomerne debeline in brez očitne avtofluorescence. Včasih se uporabljajo stekelca iz kremenčevega stekla.
(2) Pokrivno steklo
Debelina pokrovnega stekla je približno 0,17 mm, gladko. Za okrepitev vzbujalne svetlobe se lahko uporablja tudi interferenčno pokrivno steklo, ki je posebno pokrivno steklo, prevlečeno z več plastmi snovi (kot je magnezijev fluorid), ki imajo različne interferenčne učinke na svetlobo različnih valovnih dolžin, zaradi česar lahko fluorescenca poteka gladko. Vzbujajoča svetloba prehaja skozi in se odbija, ta odbita vzbujevalna svetloba vznemirja vzorec.
(3) Vzorec
Rezine tkiva ali drugi vzorci ne smejo biti predebeli. Če je predebela, bo večina vzbujalne svetlobe porabljena v spodnjem delu preparata, medtem ko zgornji del, ki ga neposredno opazuje leča objektiva, ne bo popolnoma vzbujen. Poleg tega na presojo vplivata prekrivanje celic ali pokritost z nečistočami.
(4) Montažno sredstvo
Glicerin se običajno uporablja kot pritrdilno sredstvo, ki ne sme imeti avtofluorescence, brezbarvno in prozorno, svetlost fluorescence pa je svetlejša pri pH 8.5-9.5, in ni lahko hitro zbledeti. Zato se kot pritrdilno sredstvo običajno uporablja enaka mešanica glicerola in 0.5mol/l raztopine karbonatnega pufra s pH od 90 do 9,5.
(5) olje za ogledalo
Na splošno je treba pri opazovanju vzorcev s fluorescenčnimi mikroskopi s temnim poljem in oljnimi imerzijskimi lečami uporabiti imerzijsko olje. Najbolje je uporabiti posebno nefluorescentno potopno olje. Namesto tega se lahko uporabi tudi zgornji glicerin, lahko pa tudi tekoči parafin, vendar je lomni količnik nizek, kar nekoliko vpliva na kakovost slike. Vpliv.
