Načelo in strukturne značilnosti fluorescenčne mikroskopije
Fluorescenčna mikroskopija uporablja točko z visoko svetlobno učinkovitostjo za oddajanje določene valovne dolžine svetlobe (kot je ultravijolična svetloba 3650 in vijolično modra svetloba 4200 in) skozi sistem barvnega filtriranja kot vzbujevalna svetloba in vzbudi fluorescentne snovi v vzorcu, da oddajajo različne barve fluorescence. Nato ga opazujemo s povečavo objektiva in okularja. Na ta način ga je enostavno prepoznati, tudi če je fluorescenca zelo šibka na močnem ozadju, z visoko občutljivostjo. Uporablja se predvsem za preučevanje strukture in delovanja celic ter kemične sestave. Osnovna zgradba fluorescenčnega mikroskopa je sestavljena iz običajnega optičnega mikroskopa in dodatkov, kot so fluorescenčni vir svetlobe, vzbujevalni filter, dihroični separator žarka in blokirni filter. Fluorescentni svetlobni viri običajno uporabljajo ultravisokotlačne živosrebrne sijalke (50-200W), ki lahko oddajajo svetlobo različnih valovnih dolžin. Vendar pa ima vsaka fluorescenčna snov valovno dolžino vzbujevalne svetlobe, ki proizvaja najmočnejšo fluorescenco, zato je treba dodati vzbujevalne filtre (običajno ultravijolične, vijolične, modre in zelene vzbujevalne filtre), ki omogočijo samo določeni valovni dolžini vzbujevalne svetlobe, da prodre in obseva osebek, medtem ko absorbira vso ostalo svetlobo. Po obsevanju z vzbujevalno svetlobo vsaka snov v zelo kratkem času oddaja vidno fluorescenco, daljšo od valovne dolžine obsevanja. Fluorescenca je specifična in je na splošno šibkejša od vzbujalne svetlobe. Za opazovanje specifične fluorescence je potrebno dodati blokado (ali zadušitev) za lečo objektiva in jo uporabiti v kombinaciji.
Razlika med fluorescenčnim mikroskopom in navadnim mikroskopom
1. Metoda osvetljevanja je običajno vrsta padajočega žarka, pri kateri se vir svetlobe projicira na vzorec skozi lečo objektiva;
2. vir svetlobe je ultravijolična svetloba s krajšo valovno dolžino in višjo ločljivostjo kot običajni mikroskopi;
3. Obstajata dva posebna filtra, tisti pred virom svetlobe se uporablja za filtriranje vidne svetlobe, tisti med okularjem in lečo objektiva pa za filtriranje ultravijoličnih žarkov za zaščito človeškega očesa.
Tudi fluorescenčna mikroskopija je vrsta optične mikroskopije, glavna razlika pa je v različnih valovnih dolžinah vzbujanja. To določa razlike v strukturi in uporabi med fluorescentno mikroskopijo in navadno optično mikroskopijo.
Fluorescenčna mikroskopija je osnovno orodje za imunofluorescenčno citokemijo. Sestavljen je iz glavnih komponent, kot so vir svetlobe, sistem filtrirne plošče in optični sistem. Uporablja določeno valovno dolžino svetlobe, da vzbudi vzorec, da oddaja fluorescenco, in jo poveča skozi sistem leč objektiva in okularja, da opazuje fluorescenčno sliko vzorca.
