Razlika med fluorescentno in lasersko konfokalno mikroskopijo
fluorescenčni mikroskop
1. Fluorescenčni mikroskop je naprava, ki uporablja ultravijolično svetlobo kot vir svetlobe za osvetlitev preizkušanega predmeta, zaradi česar oddaja fluorescenco, nato pa opazuje obliko in položaj predmeta pod mikroskopom. Fluorescenčna mikroskopija se uporablja za preučevanje absorpcije, transporta, porazdelitve in lokalizacije snovi v celicah. Nekatere snovi v celicah, kot je klorofil, lahko po izpostavitvi ultravijoličnemu sevanju oddajajo fluorescenco; Nekatere snovi same morda ne oddajajo fluorescence, če pa jih obarvamo s fluorescenčnimi barvili ali fluorescentnimi protitelesi, lahko oddajajo fluorescenco tudi pod ultravijoličnim sevanjem. Fluorescenčna mikroskopija je eno od orodij za kvalitativne in kvantitativne raziskave teh snovi.
2. Princip fluorescenčnega mikroskopa:
(A) Vir svetlobe: Vir svetlobe oddaja svetlobo različnih valovnih dolžin (od ultravijolične do infrardeče).
(B) Vir svetlobe z vzbujalnim filtrom: oddaja svetlobo določene valovne dolžine, ki lahko povzroči fluorescenco v vzorcu, medtem ko blokira svetlobo, ki je neuporabna za vzbujevalno fluorescenco.
(C) Fluorescentni primerki: običajno obarvani s fluorescentnimi pigmenti.
(D) Filter za blokiranje: selektivno prenaša fluorescenco tako, da blokira vzbujevalno svetlobo, ki je vzorec ni absorbiral, nekatere valovne dolžine pa se selektivno prenašajo tudi pri fluorescenci. Mikroskop, ki uporablja ultravijolično svetlobo kot vir svetlobe za oddajanje fluorescence iz obsevanega predmeta. Elektronski mikroskop sta leta 1931 prvič sestavila Knorr in Harroska v Berlinu v Nemčiji. Ta vrsta mikroskopa namesto svetlobnega žarka uporablja elektronski žarek visoke hitrosti. Zaradi veliko krajše valovne dolžine toka elektronov v primerjavi s svetlobnimi valovi lahko povečava elektronskega mikroskopa doseže 8{3}}0000-krat, z najmanjšo mejo ločljivosti 0,2 nanometra. Vrstični elektronski mikroskop, ki so ga začeli uporabljati leta 1963, omogoča ljudem, da vidijo drobne strukture na površini predmetov.
3. Področje uporabe: Uporablja se za povečavo slik majhnih predmetov. Na splošno se uporablja za opazovanje biologije, medicine, mikroskopskih delcev itd.
konfokalni mikroskop
1. Konfokalni mikroskop odbiti svetlobni poti doda polodsevno lečo, ki ukrivi odbito svetlobo, ki je že prešla skozi lečo, v druge smeri. V žarišču je pregrada z luknjico, majhna luknjica pa se nahaja v žarišču. Za pregrado je fotopomnoževalna cev. Lahko si predstavljamo, da se odbita svetloba pred in za žariščem zaznavne svetlobe ne more usmeriti na majhno luknjo skozi ta konfokalni sistem in jo bo blokirala pregrada. Fotometer torej meri intenzivnost odbite svetlobe v gorišču.
2. Načelo: Tradicionalni optični mikroskopi uporabljajo poljske svetlobne vire in na sliko vsake točke na vzorcu bo vplivala difrakcija ali razpršena svetloba iz sosednjih točk; Konfokalni mikroskop z laserskim skeniranjem uporablja laserski žarek za oblikovanje točkovnega vira svetlobe skozi osvetljeno luknjico za skeniranje vsake točke v goriščni ravnini vzorca. Osvetljena točka na vzorcu se posname na luknjici za zaznavanje in jo sprejme fotopomnoževalna cev (PMT) ali naprava za termoelektrično spajanje (cCCD) točko za točko ali črto po luknjici za zaznavanje, kar hitro oblikuje fluorescenčno sliko na računalniškem monitorju. zaslon. Luknjica za osvetlitev in luknjica za zaznavanje sta konjugirani glede na goriščno ravnino leče objektiva. Točke na goriščni ravnini so istočasno fokusirane na osvetljevalno in emisijsko luknjico, točke zunaj goriščne ravnine pa ne bodo prikazane na zaznavni luknjici. Posledica tega je konfokalna slika, ki predstavlja optični prerez vzorca, s čimer se odpravi pomanjkljivost zamegljenih slik pri običajni mikroskopiji.
3. Področja uporabe: vključujejo medicino, raziskave na živalih in rastlinah, biokemijo, bakteriologijo, celično biologijo, tkivo in zarodke, znanost o hrani, genetiko, farmakologijo, fiziologijo, optiko, patologijo, botaniko, nevroznanost, morsko biologijo, znanost o materialih, elektroniko, mehanika, naftna geologija in mineralogija.
