Pravilna uporaba invertne fluorescenčne mikroskopije
Invertni fluorescenčni mikroskop je večnamenski mikroskop, ki se uporablja na področju vrhunskih bioloških znanstvenih raziskav. Njegova struktura je zapletena in draga. Zato morajo učitelji, da bi podiplomski študenti medicine pravilno obvladali delovanje in standarde uporabe invertnega fluorescenčnega mikroskopa, najprej naučiti osnovno znanje o invertnem fluorescenčnem mikroskopu, preden pokažejo dejansko delovanje invertnega fluorescenčnega mikroskopa. Predstaviti morajo strukturo, načelo, delovanje in osnovne metode uporabe invertnega fluorescenčnega mikroskopa, nato pa prikazati različne funkcije za različne vzorce v posebnih postopkih uporabe, s čimer postopoma postanejo delovanje in uporaba invertnega fluorescenčnega mikroskopa standardizirani za podiplomske študente medicine.
1. Pravilna uporaba vizualnega opazovanja. Ena od funkcij invertnega fluorescenčnega mikroskopa je opazovanje v svetlem vidnem polju. Njegovo osnovno načelo je doseči slikanje v svetlem ozadju na podlagi različne absorpcije svetlobe vsakega dela vzorca po osvetlitvi s svetlobo. Primeren je predvsem za opazovanje obarvanih ali obarvanih celic, rezin tkiva in drugih vzorcev.
2. Pravilna uporaba diferencialnega opazovanja. Druga funkcija invertnega fluorescenčnega mikroskopa je opazovanje fazne razlike. Njegov osnovni princip je pretvorba optične razlike poti različnih delov vzorca v amplitudno razliko in opazovanje skozi objektiv fazne razlike s fazno ploščo in reflektorjem s krožno zaslonko. Primeren je predvsem za opazovanje živih celic ali neobarvanih rezin tkiva. V procesu eksperimentalnega poučevanja je poleg pravilnega usmerjanja podiplomskih študentov medicine k upoštevanju osnovnih operativnih metod opazovanja fazne razlike pomembnejše, da jih usmerjamo k razumevanju in obvladovanju vzorcev z opazovanjem fazne razlike. Za njih je najpogosteje uporabljena metoda v prihodnjih znanstvenih raziskavah mikroskopsko opazovanje gojenih celic. Prvič, za izbiro celične opreme je na splošno priporočljivo uporabljati posodice za gojenje, krožnike in steklenice iz stekla in plastičnih materialov. Večinoma so brezbarvni in prozorni ter jih je mogoče neposredno opazovati pod invertnim fluorescenčnim mikroskopom, ne da bi bilo treba izliti celično tekočino ali opraviti druge obdelave. Drugič, med mikroskopskim opazovanjem ne odpirajte pokrova opreme naključno, da preprečite kontaminacijo celic. Nazadnje, operaterji morajo nositi rokavice, maske in bele plašče, da ne le zaščitijo svoje zdravje, ampak tudi preprečijo kontaminacijo celic.
3. Pravilna uporaba opazovanja fluorescence. Tretja funkcija invertnega fluorescenčnega mikroskopa je opazovanje fluorescence. Njegovo osnovno načelo je uporaba vzbujevalne svetlobe za vzbujanje vzorca za proizvodnjo fluorescence, s čimer se doseže opazovanje oblike in položaja vzorca. Primeren je predvsem za opazovanje fluorescenčno označenih vzorcev. Opazovanje fluorescence je pomembna funkcija invertne fluorescenčne mikroskopije z dragimi dodatki in posebno uporabo. Da bi podiplomski študenti medicine pravilno obvladali delovne norme opazovanja fluorescence, jih učitelji ne le naučijo osnovnih operativnih metod, ampak, kar je še pomembneje, naučijo jih edinstvenosti le-teh. Prvič, pri pripravi vzorca morata biti površina stekelca in pokrovnega stekla gladka, debelina pa primerna (predmetno stekelec mora biti med 0,8 mm in 1,2 mm, pokrovno steklo pa mora biti približno {{5 }}.17 mm); Vzorec mora imeti primerno debelino, pri tem pa se izogibati prekrivanju celic ali maskiranju nečistoč; Tesnilno sredstvo mora uporabiti enako mešanico glicerola in karbonatnega pufra (0.5mol/L pH 9.0-9.5). Drugič, pred opazovanjem fluorescence je treba ugasniti luči v prostoru in belo svetlobo invertnega fluorescenčnega mikroskopa, da zagotovimo, da so v okolju temne sobe. Nazadnje, pri opazovanju fluorescence je treba strogo nadzorovati čas opazovanja, na splošno 1-2 ur na čas, sicer bo fluorescenca upadla in izginila; Pri nastavljanju svetlobnega vira nosite zaščitna očala, da preprečite poškodbe očal zaradi UV žarkov.
4. Pravilna uporaba zajema slike. Pri znanstvenih raziskavah se ne zahteva le, da lahko invertna fluorescenčna mikroskopija doseže več opazovanj, ampak tudi, da lahko invertna fluorescenčna mikroskopija doseže zajem slike. Sistem invertnega fluorescenčnega mikroskopa združuje optični mikroskop z računalnikom prek fotoelektrične pretvorbe, kar omogoča ne le mikroskopsko opazovanje na okularju, temveč tudi dinamično opazovanje slike v realnem času, urejanje in shranjevanje v računalniku.
