Zgradba in glavne komponente fluorescenčnega mikroskopa
Fluorescenčna mikroskopija je bistveno orodje v imunofluorescentni citokemiji. Sestavljen je iz glavnih komponent, kot so vir svetlobe, sistem filtrirnih plošč in optični sistem. Gre za uporabo določene valovne dolžine svetlobe za vzbuditev vzorca, da oddaja fluorescenco, in opazovanje fluorescenčne slike vzorca z ojačanjem leče objektiva in sistema okularja.
Zgradba in glavne komponente fluorescenčnega mikroskopa
(1) Vir svetlobe
Dandanes se kot svetlobni viri pogosto uporabljajo 200 W ultravisokotlačne živosrebrne sijalke. Izdelani so iz kremenčevega stekla, s kroglasto obliko na sredini, v notranjost pa je napolnjena določena količina živega srebra. Med delom razelektritev med obema elektrodama povzroči izhlapevanje živega srebra, zračni tlak v kroglici pa hitro narašča. Ko živo srebro popolnoma izhlapi, lahko doseže 50-70 standardni atmosferski tlak in ta proces običajno traja približno 5-15 minut. Luminescenca ultravisokotlačne živosrebrne žarnice je posledica oddajanja svetlobnih kvantov med kontinuirano disociacijo in redukcijo molekul živega srebra z razelektritvijo med elektrodama. Oddaja močno ultravijolično in modro-vijolično svetlobo, ki je dovolj za vzbujanje različnih fluorescenčnih snovi, zato se pogosto uporablja v fluorescenčni mikroskopiji.
Zelo visokotlačne živosrebrne sijalke oddajajo tudi veliko toplote. Zato mora hiša svetilke imeti dobre pogoje za odvajanje toplote, temperatura delovnega okolja pa ne sme biti previsoka.
Novo ultravisokotlačno živosrebrno sijalko lahko na začetku uporabe prižgete brez visoke napetosti. Po določenem obdobju uporabe ga je treba zagnati pri visoki napetosti (približno 15000 V). Po zagonu je vzdrževalna delovna napetost običajno 50-60V, delovni tok pa približno 4A. Povprečna življenjska doba 200 W ultravisokotlačne živosrebrne sijalke je približno 200 ur, če jo vsakič uporabljate 2 uri. Krajši kot je delovni čas, krajša je življenjska doba. Če se uporablja samo 20 minut, se življenjska doba skrajša za 50 odstotkov. Zato pri uporabi zmanjšajte število zagonov. Med uporabo žarnice se njena svetlobna učinkovitost postopoma zmanjšuje. Ko lučka ugasne, počakajte, da se ohladi, preden znova zaženete. Žarnice ne ugasnite takoj po vžigu, da ne poškodujete elektrode zaradi nepopolnega izhlapevanja živega srebra. Na splošno je treba počakati 15 minut. Zaradi visokega tlaka ultravisokotlačne živosrebrne žarnice in močnih ultravijoličnih žarkov je treba žarnico pred vžigom postaviti v komoro svetilke, da ne poškodujete oči in povzročite delovanja v primeru eksplozije. .
Vezje svetlobnega vira ultravisokotlačne živosrebrne žarnice (100 W ali 200 W) in več delov, vključno s transformatorjem, balastom in zagonom. Obstaja sistem za prilagajanje svetlobnega središča žarnice v komori svetilke. Za žarnico žarnice je nameščen aluminij konkavni reflektor, spredaj pa svetlobna leča.
Domača ultravisokotlačna živosrebrna žarnica GCQ-200 ima dobro delovanje in lahko nadomesti uvožene žarnice, kot je HBO-200. Povprečna življenjska doba je več kot 200 ur, cena pa je relativno nizka.
Enostavna in prenosna naprava z visoko barvno temperaturo brom volfram fluorescenčnega vira svetlobe, razvita v moji državi, je majhna, majhna teža, nizka poraba energije, dvojna uporaba AC in DC (z napajalnikom DC), enostavna za prenašanje, enostavna za uporabo in ima populariziran in uporabljen.
(2) Sistem barvnih filtrov
Sistem barvnih filtrov je pomemben del fluorescenčnega mikroskopa, ki je sestavljen iz vzbujevalne filtrirne plošče in stiskalne filtrirne plošče. Model filtrske plošče in ime posameznega proizvajalca pogosto nista enotna. Filtrirne plošče so praviloma poimenovane po osnovni barvi, črke spredaj predstavljajo barvo, črke zadaj steklo, številke pa značilnosti modela. mikroskop olympus
(3) Objektiv
Uporabljajo se lahko različne objektivne leče, vendar se uporabljajo akromatične objektivne leče, ker je njihova avtofluorescenca minimalna in so njihove lastnosti prepustnosti svetlobe (območje valovnih dolžin) primerne za fluorescenco. Ker je fluorescenčna svetlost slike v vidnem polju mikroskopa sorazmerna s kvadratom razmerja zaslonke leče objektiva in obratno sorazmerna z njeno povečavo, je za izboljšanje svetlosti fluorescenčne slike leča objektiva z velikim uporabiti razmerje zaslonke. Še posebej pri veliki povečavi je njegov učinek zelo očiten. Zato je treba pri vzorcih z nezadostno fluorescenco uporabiti lečo objektiva z velikim razmerjem zaslonke s čim nižjim okularjem (4×, 5×, 6,3× itd.).
(4) Ogledalo
Odbojna plast reflektorja je na splošno prevlečena z aluminijem, ker aluminij absorbira manj v modro-vijoličnem območju ultravijolične in vidne svetlobe, odboj pa je več kot 90-odstoten, medtem ko je odboj srebra le 70-odstoten. Na splošno se uporablja ploščati reflektor.
(5) Kondenzator
Kondenzatorji za fluorescenčno mikroskopijo so izdelani iz kremenčevega stekla ali drugega UV-prosojnega stekla. Obstajata dve vrsti kondenzatorjev čistega polja in kondenzatorjev temnega polja. Obstajajo tudi fazno kontrastni fluorescenčni koncentratorji.
(6) Epi-light naprava
Nova vrsta epi-svetlobne naprave je, da se po tem, ko svetloba iz svetlobnega vira zadene interferenčni spektroskopski filter, del kratke valovne dolžine (ultravijolično in vijolično modro) odbije zaradi lastnosti prevleke na filtru. Ko je filter obrnjen proti viru svetlobe, je kot 45°. Ko je nagnjen, strelja na lečo objektiva navpično in strelja na vzorec skozi lečo objektiva, tako da je vzorec vzbujen. V tem času leča objektiva neposredno deluje kot zbiralnik svetlobe. Hkrati je dolgi del filtra (zelen, rumen, rdeč itd.) Prosojen za filter, tako da se ne odbija v smeri leče objektiva in filter deluje kot vzbujevalna filtrirna plošča, Ker je fluorescenca vzorca v območju dolgih valovnih dolžin vidne svetlobe, lahko preide skozi filter in doseže okular za opazovanje, se svetlost fluorescenčne slike povečuje s povečanjem povečave in je močnejša od prepuščene svetlobe. vir pri veliki povečavi. Poleg funkcije prepustnega svetlobnega vira je bolj primeren za neposredno opazovanje neprozornih in prosojnih vzorcev, kot so debele rezine, filtrske membrane, kolonije in vzorci tkivnih kultur. Novi fluorescenčni mikroskopi, razviti v zadnjih letih, večinoma uporabljajo epi-light naprave, ki se imenujejo epi-fluorescenčni mikroskopi.
