Razlogi, zakaj je treba bakterije popraviti pred obarvanjem v poskusih z mikroskopijo:
Ubijanje celic je lažje obarvati barvila.
Naj se bakterije oprimejo steklenih diapozitivov in jih voda ne zlahka izpra.
Pri pritrditvi je treba počasi posušiti zrak. Če je potrebno pospešiti postopek, ga lahko nekajkrat posušite od razdalje nad plamenom alkoholne svetilke. Ne posušite stekla, dokler se ne segreje, sicer lahko poškoduje bakterijsko življenjsko obliko
Gramovo obarvanje in mikroskopsko opazovanje bakterij
Eksperimentalno načelo
Načelo obarvanja z gramom: različne reakcije bakterij na obarvanje z gramom povzročajo razlike v sestavi in strukturi njihovih celičnih sten. Celična stena gram pozitivnih bakterij je sestavljena predvsem iz mreže peptidoglikanov. Pri zdravljenju z etanolom dehidracija povzroči zmanjšanje velikosti por in prepustnosti omrežne strukture, kar otežuje, da se kristalno vijolični jodni kompleks izpira in zadrži znotraj celice. Po dekolorizaciji in nasprotju s tem se še vedno zadržuje modra vijolična barva začetnega barvila. Peptidoglikanska plast na celični steni gram negativnih bakterij je tanka in ima visoko vsebnost lipidov. Zato se ob dekoloriziranem lipidu raztopi v etanolu (ali acetonu), kar poveča prepustnost celične stene in olajša izpiranje kristalno vijoličnega joda kompleksa. Po nasprotju s kontrastanom celice obarvamo z rdečo barvo kontrastain. Načelo slikanja mikroskopa: Sodobni navadni optični mikroskopi uporabljajo dva sklopa sistemov leč, okular in objektivno lečo, za povečanje in sliko, zato jih pogosto imenujemo sestavljeni mikroskopi. V optičnem sistemu mikroskopa je zmogljivost objektivne leče najbolj kritična, povečava naftne leče pa je najvišja, kar je najpomembnejše za mikrobiološke raziskave. Dodajanje olja objektiva med steklenim diapozitivom in lečo je v glavnem povečati svetlost osvetlitve in izboljšati ločljivost mikroskopa. Uporaba olja namesto zraka kot medija za širjenje svetlobe zmanjšuje lom ali popolni odsev svetlobe, zaradi česar je opažena slika jasnejša.
