Prednosti in slabosti večfotonske laserske vrstične mikroskopije
Večfotonska laserska skenirna mikroskopija je eksperimentalna metoda, ki temelji na tehnologiji laserskega skenirnega mikroskopa, ki zagotavlja večjo **zmožnost optičnega rezanja pri 3D opazovanju. Metoda večfotonskega vzbujanja fluorescence uporablja dolge valovne dolžine rdeče ali skoraj infrardeče svetlobe za pridobivanje fluorescenčnih slik visoke ločljivosti vzorcev z minimalnim ubijanjem aktivnih vzorcev, zaradi česar je primerna za slikanje živih celic, zlasti debelih živih tkiv, kot so rezine možganov, zarodki, itd. cele organe in celo cele organizme.
Prednosti so naslednje:
1, uporaba rdeče svetlobe ali infrardeče svetlobe vzbujanja, sipanje svetlobe je majhno(razpršenostmajhnadelcev in valovna dolžina četrte potence inverznega razmerja).
2, ne potrebuje luknjice, lahko zbere več razpršenih fotonov iz slikovnega preseka.
3, luknjica ne more razlikovati med razpršenimi fotoni, ki jih oddaja neostreno območje ali žariščno območje, večfotonsko razmerje med signalom in šumom globokega slikanja je dobro.
4, enofotonsko vzbujanje ultravijolične ali vidne svetlobe, ki se uporablja v žarku, da doseže goriščno ravnino, preden se vzorec zlahka absorbira in oslabi, ni enostavno globoko vzbujanje.
5, pri opazovanju z biološkim mikroskopom, * prvi pomislek je, da ne poškodujemo aktivnega stanja samega organizma, da ohranimo vodo, koncentracijo ionov, kisik in kroženje hranil. Pri opazovanju svetlobe morata tako toplotna kot fotonska energija ostati v celici brez škode za količino sevanja, svetlobno energijo.
6, večfotonski mikroskop ima tudi veliko prednosti. Kot so tridimenzionalna ločljivost, globinski vdor, učinkovitost razprševanja, svetloba v ozadju, razmerje med signalom in šumom, nadzor itd., prejšnji laserski mikroskopi nimajo ali imajo neprimerljive lastnosti.
Večfotonski konfokalni laserski vrstični mikroskop je bil razširjen na različna raziskovalna in uporabna področja. Sposoben je tridimenzionalnega nedestruktivnega opazovanja vzorcev v njihovem naravnem stanju in lahko izboljša ločljivost in razmerje med signalom in šumom sistema. S spremembo lastnosti materiala po večfotonskem vzbujanju je mogoče doseči tudi tridimenzionalno shranjevanje višinskih podatkov in tridimenzionalno mikrofabrikacijo v kateri koli smeri, kar ima visoko aplikativno vrednost. Lahko verjamemo, da bo z nadaljnjim razvojem strojev, materialov, laserske tehnologije in drugih tehnologij, povezanih z večfotonsko konfokalno mikroskopijo, večfotonski konfokalni laserski skenirni mikroskop večji razvoj in širša uporaba.
Slabosti so naslednje:
1, samo fluorescenčno slikanje.
2, če vzorec vsebuje kromofore, ki lahko absorbirajo vzbujevalno svetlobo, kot naprimerpigmenti, vzorecse lahko termično poškoduje.
3, je ločljivost nekoliko zmanjšana, čepravizboljšati ga je mogoče s hkratno uporabo konfokalne zaslonke, ampakprišlo bo do izgube signala.
4. Stroški večfotonske vrstične mikroskopije so visoki zaradi omejitev dragih ultrahitrih laserjev.
