PH meter - Določanje in uravnavanje pH medija
Na vse mikroorganizme vpliva pH okolja, v katerem živijo. Pogosto prisotnost selektivnih vrst zoži pH območje, v katerem rastejo. Včasih lahko kislost ali alkalnost medija delujeta tudi kot dejavnik selekcije rasti. Pri biokemičnih preskusnih gojiščih pa je območje pH, v katerem mikroorganizmi izkazujejo tk aktivnost v substratu, ožje od razpona pH, potrebnega za rast: zato je pomembno, da pH gojišča prilagodite pričakovanemu razponu. Ko laboratorij pripravlja gojišče glede na sestavo gojišča, je treba pH preveriti in uravnati. Poudariti je treba, da je treba končni pH tudi pri že pripravljenem sintetičnem dehidriranem mediju, ki ga zagotovi proizvajalec (še posebej pri nekaterih osnovnih dehidriranih gojiščih), izmeriti po izdelavi eksperimentalnega medija.
Najbolj natančen način za merjenje pH medija je pH meter. Pred uporabo ga je treba umeriti s standardno pufersko raztopino znanega pH (običajno je pH 4 do 7). Elektrodo pH-metra splaknemo z destilirano vodo in jo potopimo v gojišče v čaši, nato pa s skale pH-metra odčitamo pH medija. Vsak proizvajalec nudi podrobna navodila za uporabo za vsako vrsto pH-metra.
Pri pripravi gojišča lahko PH enostavno uravnavamo s pH metrom z mehanskim mešanjem. Gojišče je treba pripraviti v posodi (kot je velika čaša), ki jo je mogoče nenehno mešati. ali magneti, oviti s teflonom. Po odmrzovanju je treba uravnati pH medija, ki vsebuje agar, kar je enostavno narediti z magnetnim mešalom, ki ga je mogoče ogreti. Pri nastavljanju pH uporabite standardno pufersko raztopino z znanim pH, da najprej umerite pH meter. Nato postavite kompozitno elektrodo in uporovni termometer (če obstaja) v medij, počasi dodajte ustrezno količino klorovodikove kisline in natrijevega hidroksida s konca čaše stran od elektrode, tako da lahko medij doseže in vzdržuje zahtevani pH.
Temperaturna kompenzacija pH-metra mora upoštevati učinek temperature na sistem elektrod: v nekaterih razredčitvah in medijih se pH znatno spreminja s temperaturo. Pri tekočih medijih in razredčitvah se lahko pH običajno prilagodi in izmeri pri 25 stopinjah ali pri temperaturi, pri kateri se uporabljajo.
Po raztapljanju je treba uravnati pH agarnega medija, temperatura raztapljanja pa je nad 45 stopinj: zato je treba pH trdnega medija določiti pri njegovi uporabni temperaturi. V tem času je treba uporabiti kompozitno elektrodo z ravno glavo in ročno umeriti temperaturno kompenzacijo pH-metra. Če se pri pripravi gojišča ugotovi, da je pH gojišča različen med stanjem taljenja in stanjem strjevanja, to pomeni, da je prišlo do napake pri prilagajanju pH.
Podobno, ko je pripravljen medij toplotno steriliziran (npr. avtoklaven), se lahko spremeni tudi pH. Pri dehidriranem mediju je proizvajalec to upošteval in običajno pH ni treba prilagajati, vendar je treba skrbno preveriti pH medija, ki ga nameravamo uporabiti. Če je treba med ponovnim raztapljanjem ali pripravo prilagoditi pH dehidriranega agarnega gojišča, je najbolje, da ga prilagodite s filtrsko sterilizirano klorovodikovo kislino in raztopino natrijevega hidroksida po koraku sterilizacije, da preprečite nastanek pregretja gojišča. Pri pripravi gojišč z različnimi surovinami ali farmacevtskimi izdelki je treba po avtoklaviranju preveriti pH gojišča. Poleg tega, če se ugotovi, da se pH medija po vsakem avtoklavu enako spreminja, se pH lahko ustrezno prilagodi pri pripravi medija. Vendar pa je še vedno treba določiti končni pH medija po sterilizaciji.
