Opombe in nasveti za uporabo večfaznih kontrastnih mikroskopov
1) Namestite napravo za fazni kontrast: odstranite zbiralno lečo običajnega mikroskopa in namestite zbiralno lečo z obročasto zaslonko na ustrezni mikroskop; odstranite običajno lečo objektiva mikroskopa in jo nadomestite z lečo objektiva s fazno ploščo; zamenjajte okular z okularji za fokusiranje za fazno kontrastne mikroskope; posebni zeleni filtri (včasih niso potrebni) so nameščeni na svetlobnem vhodu svetlobnega vira.
2) Poravnava svetlobe in ostrenje: Prilagodite okular za ostrenje in vijak za nastavitev debeline, dokler ne bosta v vidnem polju jasno vidna bel krog in črn krog. Črni krog je pritrjen, beli krog pa se lahko premakne z nastavitvijo vijaka na kondenzatorski napravi, tako da črni krog in beli krog popolnoma sovpadata. Odstranite okular za ostrenje in ga zamenjajte z originalnim okularjem mikroskopa, da preverite.
Analiza problemov pri uporabi fazno kontrastnega mikroskopa
1. Vpliv debeline vzorca Pri opazovanju faznega kontrasta mora biti debelina vzorca 5 μm ali manj. Pri uporabi debelejšega vzorca je zgornja plast vzorca zelo jasna, globoka plast pa bo zamegljena in povzročila motnje faznega premika. in sipanje svetlobe.
2. Vpliv pokrovnega in drsnega stekla Vzorec mora biti pokrit s pokrovnim steklom, sicer se svetli obroč obročaste diafragme in temni obroč fazne plošče težko prekrivata. Opazovanje faznega kontrasta ima tudi visoke zahteve glede kakovosti stekla diapozitivov in pokrovnega stekla. Če so praske, neenakomerna debelina ali neenakomernost, bo prišlo do popačenja svetlega obroča in fazne motnje. Poleg tega, ko je drsnik predebel ali pretanek, bo svetel obroč obročaste diafragme postal večji ali manjši.
3. Halo in učinek bledenja Ko v procesu slikanja s fazno kontrastnim mikroskopom struktura postane temna zaradi fazne zakasnitve, to ni izguba svetlobe, temveč posledica prerazporeditve svetlobe na ravnini slike. Torej bo svetloba, ki je očitno izgubljena v temnih območjih, videti kot svetel halo okoli temnejših predmetov. To je slabost fazno kontrastne mikroskopije, ki ovira opazovanje finih struktur, halo pojav pa je resnejši, ko je obročasta diafragma zelo ozka. Drug pojav pri faznokontrastni mikroskopiji je učinek senčenja, ki se nanaša na izgubo kontrasta na robovih večjega območja z enako fazno zakasnitvijo, ko jo opazujemo s faznim kontrastom.
4. Fazna inverzija Ko je n'n, sta svetli in temni kontrast slike ravno nasprotna, kar imenujemo fazna inverzija. Neprepoznavno je, ko je fazna razlika δ=0 in kontrast s povečanjem δ večji, fazna inverzija pa se pojavi, ko δ še naprej narašča do določene vrednosti. Pri uporabi objektiva z 90-odstotno visoko absorpcijsko vrednostjo (visok kontrast) je ta vrednost transformacije približno 0,55λ, pri uporabi objektiva s 70-odstotno standardno absorpcijsko vrednostjo pa približno 0,33λ . Za razrešitev manjših razlik v optični poti je treba uporabiti objektive z višjimi vrednostmi absorbance.
