Učilnica za mikroskopsko slikanje 丨Fluorescenčni mikroskop s širokim poljem
V aplikacijah za slikanje živih celic fluorescenčna mikroskopija s širokim poljem olajša opazovanje dinamike adherentnih celic, ki rastejo v posebnih okoljskih komorah, nameščenih na mizici mikroskopa. V svoji najosnovnejši konfiguraciji je standardni obrnjeni mikroskop za tkivno kulturo, opremljen s fluorescenčno osvetlitvijo EPI, povezan s sistemom detektorjev površinskih nizov (običajno kamera CCD), ustreznimi fluorescenčnimi filtri in sistemom zaklopa za omejitev prekomerne izpostavljenosti celic škodljivi vzbujevalni svetlobi . Osnovna fluorescenčna mikroskopija temelji na skrbno usklajenih interferenčnih filtrih za izbiro specifičnih pasovnih širin za osvetljevanje in zaznavanje oddane svetlobe. Viri svetlobe vključujejo živosrebrne, ksenonske in metalhalogenidne obločne sijalke, laserske sisteme za širitev snopa in svetleče diode (LED), ki zahtevajo različne specifikacije filtrov. Sintetični fluoroforji, ki se uporabljajo v fluorescenčni mikroskopiji, imajo emisijske spektre, ki pokrivajo skoraj ultravijolična, vidna in skoraj infrardeča območja. Uporaba genetsko kodiranih fluorescentnih proteinov je močno razširila zmogljivosti fluorescenčne mikroskopije pri slikanju živih celic, kar raziskovalcem omogoča natančno ciljanje podceličnih regij, ki jih zanimajo.
Nuohai LS 18, nova vrsta svetlobnega mikroskopa za osvetljevanje, ki ga je neodvisno razvil Nuohai, je posebej zasnovan za visokoločljivo 3D slikanje prosojnih velikih vzorcev tkiva in je namenjen raziskovanju različnih nedotaknjenih tkiv, kot so možgani, vranica, tanko črevo. , ledvice, pljuča, srce in tumor. 3D natančna struktura organov.
Pri širokopoljski fluorescenci emisija s polno zaslonko, ki jo zbere mikroskopski objektiv, maksimira posneti signal, hkrati pa zmanjša zahtevani čas osvetlitve. Tako je mogoče vzorce slikati z zelo kratkimi svetlobnimi obdobji. Glavna pomanjkljivost slikanja s širokim poljem je, da je fluorescenca iz območij, ki so daleč od goriščne ravnine, kot tudi signal ozadja, nezaželena svetloba, ki pogosto zakrije zanimive značilnosti. Zato daje slikanje s širokim poljem najboljše rezultate, če so značilnosti, ki nas zanimajo, velike (kot so organeli) ali zelo pikčaste. Najrazličnejši vzorci živih celic, vključno s prilepljenimi celicami, bakterijami, kvasovkami in zelo tankimi deli tkiva, so idealni kandidati za fluorescenčno slikanje s širokim poljem, vendar so debelejša tkiva (nad 5 mikronov) najbolje uporabljena pri slikanju z naprednejšo metodo.
Čeprav je prišlo do velikega napredka pri fluorescentnem slikanju s sintetičnimi fluorescentnimi barvili, kvantnimi pikami in fluorescentnimi proteini, je v nekaterih primerih koristno kombinirati fluorescenco z drugimi načini slikanja. Na primer, DIC se lahko uporablja v povezavi s širokopoljsko fluorescenco za spremljanje viabilnosti celic in splošne morfologije med preučevanjem zanimivih pojavov za specifične označene tarče. Pridobivanje DIC in fluorescence na eni sliki je običajno nepraktično, vendar se lahko v pravilno konfiguriranem mikroskopu obe tehniki uporabljata zaporedno. Tako je po slikanju v epifluorescenčnem načinu mogoče pridobiti slike DIC iz fluorescentno označenih vzorcev z uporabo prepuščene svetlobe. Obe sliki se lahko med naknadno analizo združita. Hkratno pridobivanje DIC in fluorescenčnih slik je možno v naprednih konfiguracijah mikroskopa s širokim poljem z uporabo spektralno ločene osvetlitve (na primer vidne in bližnje infrardeče) in adapterjev za dvojno kamero ali kamero z deljenim pogledom. V večini konfokalnih mikroskopov z laserskim skeniranjem je mogoče slike hkrati pridobiti v fluorescenčnem in DIC načinu, s čimer se odpravi potreba po naknadni obdelavi. Fazni kontrast in Hoffmanov modulacijski kontrast se lahko uporabljata tudi v povezavi s širokopoljsko fluorescenčno mikroskopijo. Vendar pa je pri teh tehnikah leča objektiva posebna, ne glede na to, ali gre za fazni obroč ali Hoffmanovo modulacijsko ploščo, bo povzročila izgubo intenzivnosti emisije za 5-15 odstotkov.
Povezava do članka: Instrument Equipment Network https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
