Uvod v prednosti in slabosti večfotonske laserske vrstične mikroskopije
1. Z uporabo rdeče svetlobe ali infrardeče svetlobe za vzbujanje je sipanje svetlobe majhno, sipanje majhnih delcev pa je obratno sorazmerno s četrto potenco valovne dolžine.
2. Več razpršenih fotonov iz slikovnega prereza je mogoče zbrati brez lukenj.
3. Luknjica ne more razlikovati razpršenih fotonov, oddanih iz defokusiranega območja ali območja izostritve, razmerje med signalom in šumom večfotonskega slikanja v globokih plasteh pa je dobro.
4. Ultravijolično ali vidno svetlobo, ki se uporablja za enofotonsko vzbujanje, vzorec zlahka absorbira in oslabi, preden žarek doseže goriščno ravnino, in je težko vzbujati globoke plasti.
5. V smislu opazovanja z biološkim mikroskopom je prvi pomislek, da ne poškodujemo aktivnega stanja samega organizma in da ohranimo pretok vode, koncentracijo ionov, kisika in hranil. V primeru opazovanja svetlobe morata tako toplota kot fotonska energija ostati znotraj količine sevanja in svetlobne energije, da se celice ne poškodujejo.
6. Večfotonska mikroskopija ima veliko prednosti. Kot so tridimenzionalna ločljivost, globinska penetracija, učinkovitost sipanja, svetloba ozadja, razmerje med signalom in šumom, nadzor itd., imajo vse značilnosti, ki jih prejšnji laserski mikroskopi niso imeli ali se z njimi niso mogli primerjati.
Slabosti večfotonske laserske vrstične mikroskopije:
1. Lahko samo slika fluorescenco.
2. Če vzorec vsebuje kromofore, ki absorbirajo vzbujevalno svetlobo, je lahko vzorec toplotno poškodovan.
3. Ločljivost je rahlo zmanjšana. Čeprav ga je mogoče izboljšati s sočasno uporabo konfokalnih lukenj, pride do izgube signala.
4. Stroški večfotonskih skenirnih mikroskopov so omejeni z dragimi ultrahitrimi laserji in so relativno visoki.
