Izboljšane prednosti večfotonske mikroskopije z laserskim skeniranjem
Večfotonska mikroskopija z laserskim skeniranjem je velika izboljšava optične mikroskopije, predvsem za opazovanje globoke strukture živih celic, fiksnih celic in tkiv ter lahko pridobi jasne in ostre večplastne strukture Z ravnine, to je optične rezine, in lahko konstruira Tridimenzionalna trdna struktura vzorca. Konfokalni mikroskop uporablja vir laserske svetlobe, ki se razširi tako, da zapolni celotno zadnjo goriščno ravnino leče objektiva, nato pa konvergira v zelo majhno točko na goriščni ravnini vzorca skozi sistem leč objektiva. Odvisno od numerične odprtine leče objektiva je premer najsvetlejše svetlobne točke približno 0,25 ~ 0,8 μm, globina pa približno 0,5 ~ 1,5 μm. Velikost konfokalne točke je odvisna od zasnove mikroskopa, valovne dolžine laserja, značilnosti leče objektiva, nastavitve stanja enote za skeniranje in narave vzorca. Terenski mikroskopi imajo velik razpon in globino osvetlitve, medtem ko imajo konfokalni mikroskopi osvetlitev koncentrirano na žariščno točko na goriščni ravnini. Najosnovnejša prednost konfokalne mikroskopije je, da lahko izvede fino optično rezanje debelih fluorescenčnih vzorcev (do 50 μm ali več) z debelino približno 0,5 do 1,5 μm. Serijo slik optičnega preseka lahko dobite s premikanjem vzorca navzgor in navzdol s koračnim motorjem mikroskopa na osi Z. Pridobivanje slikovnih informacij je nadzorovano znotraj natančne ravnine in ga ne bodo motili signali z drugih lokacij na vzorcu. Po odstranitvi učinka fluorescence ozadja in povečanju razmerja med signalom in šumom sta kontrast in ločljivost konfokalnih slik znatno izboljšana v primerjavi s fluorescenčnimi slikami s tradicionalno osvetlitvijo polja. V mnogih vzorcih je veliko zapletenih strukturnih komponent prepletenih, da tvorijo kompleksne sisteme, toda ko je mogoče zbrati dovolj optičnih odsekov, jih lahko rekonstruiramo v 3D s programsko opremo. Ta eksperimentalni pristop se pogosto uporablja v bioloških raziskavah za pojasnitev kompleksnih strukturnih in funkcionalnih odnosov med celicami ali tkivi.
