Metoda detekcije s fluorescenčno mikroskopijo
fluorescenčni mikroskop
Fluorescenčna mikroskopija je temeljno orodje za imunofluorescenčno citokemijo. Sestavljen je iz glavnih komponent, kot so vir svetlobe, sistem filtrirnih plošč in optični sistem. Uporablja določeno valovno dolžino svetlobe za vzbujanje vzorca in oddajanje fluorescence, ki se poveča s sistemom objektiva in okularja za opazovanje fluorescenčne slike vzorca (slika 1).
(1) Vir svetlobe
Dandanes se kot vir svetlobe običajno uporablja 200 W ultravisokotlačna živosrebrna sijalka. Izdelan je iz kremenčevega stekla, s kroglasto obliko v sredini in z določeno količino živega srebra v notranjosti. Med delovanjem razelektritev med obema elektrodama povzroči izhlapevanje živega srebra in tlak v krogli se hitro poveča. Ko živo srebro popolnoma izhlapi, lahko doseže 50-70 standardni atmosferski tlak, kar običajno traja približno 5-15 minut. Luminescenca ultravisokotlačnih živosrebrnih žarnic je posledica razelektritve med elektrodama, ki nenehno disociira in reducira molekule živega srebra ter oddaja fotone. Oddaja močno ultravijolično in modro vijolično svetlobo, ki zadostuje za vzbujanje različnih fluorescenčnih snovi, zato se pogosto uporablja v fluorescenčnih mikroskopih.
Varnostni ukrepi za uporabo fluorescenčnega mikroskopa
(1) Strogo upoštevajte navodila tovarne fluorescenčnega mikroskopa in ne spreminjajte programa samovoljno.
(2) Pregled je treba opraviti v temnem prostoru. Ko vstopite v temnico, priključite napajanje in prižgite ultravisokotlačno živosrebrno žarnico za 5-15 minut. Ko svetlobni vir oddaja močno svetlobo in se stabilizira, se morajo oči popolnoma prilagoditi temnici, preden začnete opazovati preparat.
(3) Da bi preprečili UV-poškodbe oči, morate pri nastavljanju vira svetlobe nositi zaščitna očala.
(4) Čas inšpekcijskega pregleda mora biti vsakokrat 1-2 ur. Če preseže 90 minut, se jakost svetlobe ultravisokotlačne živosrebrne žarnice postopoma zmanjšuje in fluorescenca oslabi; Vzorci, izpostavljeni ultravijoličnemu sevanju 3-5 dni
Po min se je tudi fluorescenca znatno zmanjšala; Torej najdaljše trajanje ne sme preseči 2-3 ur.
(5) Življenjska doba svetlobnega vira fluorescentnega mikroskopa je omejena, zato je treba vzorec pregledati centralno, da prihranite čas
Prihranite čas in zaščitite vir svetlobe. Ko je vreme vroče, je treba dodati električni ventilator za odvajanje toplote in hlajenje. Pri zamenjavi nove žarnice je treba čas uporabe beležiti od začetka. Ko je luč ugasnjena in jo želite ponovno uporabiti, morate počakati, da se žarnica dovolj ohladi, preden jo prižgete. Izogibajte se prižiganju svetlobnega vira večkrat na dan.
(6) Opazujte vzorec takoj po barvanju, saj bo fluorescenca sčasoma postopoma oslabela. Če je vzorec shranjen v polietilenski plastični vrečki pri 4 stopinjah, lahko upočasni čas slabljenja fluorescence in prepreči izhlapevanje pritrdilnega sredstva.
(7) Merila za presojo svetlosti fluorescence so na splošno razdeljena na štiri ravni, in sicer "ena" - brez ali vidna šibka fluorescenca. "+" - Vidna je samo vidna fluorescenca. ++- Vidno s svetlo fluorescenco. "+++" - Vidna in bleščeča fluorescenca.
