Metode in previdnostni ukrepi pri uporabi fluorescenčnega mikroskopa
Način uporabe:
(1) Postavite list materiala na nosilni oder.
(2) Vklopite regulator napetosti fluorescenčnega mikroskopa. Nato pritisnite začetno skupino za vžig. UV žarnica se ne sme izklopiti 15 minut in se ne sme ponovno zagnati 3 minute po izklopu.
(3) Obrnite vzbujevalni filter na v, dihroični film na v, izberite blokirni filter 495 ali 475 nm.
(4) Izberite uvFL40, uvFL100 fluorescenčno sprejemno mikroskopijo z objektivom.
(5) Dodajte nefluorescentno olje na objektno stekelce, najprej 40-kratno in nato 100-kratno fokusno mikroskopijo. Prikaži fluorescenco.
(7) Ker fluorescenčni material zaradi ultravijoličnega obsevanja z rastjo fluorescence sčasoma postopoma oslabi, je treba pri mikroskopskem pregledu pogosto spreminjati vidno polje.
(8) lahko uporabi tudi mikroskopski material uvFL10 ali uvFL20 z majhno povečavo (z majhno povečavo brez dodajanja nefluorescenčnega olja).
Metoda snemanja fluorescenčne slike:
Fluorescenčna slika, vidna s fluorescenčnim mikroskopom, ena je z morfološkimi značilnostmi, druga z barvo in svetlostjo fluorescence, pri presoji rezultatov je treba oboje združiti s celovito presojo. Rezultati se beležijo po subjektivnih kazalnikih, to je z vizualnim opazovanjem delavca. Kot splošno kvalitativno opažanje je načeloma zanesljivo. Z razvojem tehnologije in znanosti se v različni meri uporablja objektivna kazalnika za beleženje rezultatov presoje, kot je uporaba celičnega spektrofotometra, analizatorja slike in drugih instrumentov. Vendar je treba rezultate, ki jih zabeležijo ti instrumenti, kombinirati tudi s subjektivno presojo.
Tehnologija fotografiranja s fluorescenčnim mikroskopom je zelo potrebna za snemanje fluorescenčnih slik, saj je fluorescenco enostavno zbledeti in oslabiti, da lahko takoj posnamete rezultate fotografije. Metoda je v osnovi enaka navadni mikrografiji. Uporabiti je treba samo fotografski film visoke hitrosti, kot je ASA200 zgoraj ali 24. zgoraj. Ker ultravijolična svetloba vpliva na učinek razpoke fluorescence, kot so markerji FITC, se v ultravijoličnem obsevanju 30-ih let svetlost fluorescence zmanjša za 50%. Zato je hitrost osvetlitve prepočasna za zajem fluorescenčne slike. Splošni raziskovalni fluorescenčni mikroskopi imajo polavtomatske ali popolnoma avtomatske mikrofotografske sistemske naprave.
Previdnostni ukrepi:
(1) Delujte v strogem skladu z zahtevami tovarniškega priročnika za fluorescenčni mikroskop, postopka ne spreminjajte samovoljno.
(2) Pregled je treba opraviti v temnici. Po vstopu v temnico priključite napajalnik, prižgite ultravisokotlačno živosrebrno žarnico za 5-15min, počakajte, da svetlobni vir oddaja močno svetlobo, da se stabilizira in so oči popolnoma prilagojene temnici in nato pa začnite opazovati osebek.
(3) Da preprečite poškodbe oči zaradi ultravijolične svetlobe, morate pri prilagajanju vira svetlobe nositi zaščitna očala.
(4) preverite čas vsakič, ko je 1 ~ 2 uri primerno, več kot 90 minut, jakost svetlobe ultravisokotlačne živosrebrne žarnice se postopoma zmanjšuje, fluorescenca oslabi; vzorci, obsevani z ultravijolično svetlobo 3 ~ 5 minut, je tudi fluorescenca znatno oslabljena; zato * ne sme biti daljši od 2 ~ 3h.
(5) Življenjska doba svetlobnega vira fluorescenčnega mikroskopa je omejena, vzorec je treba centralizirati, da bi prihranili čas in zaščitili svetlobni vir. Ko je vroče, je treba dodati ventilator za hlajenje, novo žarnico je treba zabeležiti od začetka uporabe časa. Ko svetilka ugasne in jo želimo ponovno uporabiti, je treba žarnico pred prižigom dovolj ohladiti. Viru svetlobe se je treba večkrat izogniti.
(6) Opazujte vzorec takoj po barvanju, saj se bo fluorescenca sčasoma postopoma zmanjšala. Če vzorec položite v polietilensko plastično vrečko, shranjeno pri 4 stopinjah, lahko odložite čas oslabitve fluorescence in preprečite izhlapevanje tesnilnega sredstva.
(7) Merila za presojo svetlosti fluorescence: na splošno razdeljena na štiri ravni, to je 'ena' - brez ali vidna šibka fluorescenca. '+' - samo jasno vidna fluorescenca. '+ +' - viden s svetlobo
