Eksperimentalni principi metode neposrednega štetja mikrobne mikroskopije
Neposredno štetje pod mikroskopom z uporabo hemocitometra je pogosto uporabljena metoda za štetje mikroorganizmov. Prednost te metode je, da je intuitivna in hitra. Ustrezno razredčeno bakterijsko suspenzijo (ali suspenzijo spor) postavite v komoro za štetje med stekelcem in pokrovnim stekelcem hemocitometra ter preštejte pod mikroskopom. Ker je prostornina štetne komore fiksna (0,1 mm2), jo je mogoče pretvoriti v skupno število mikroorganizmov na enoto prostornine glede na število mikroorganizmov, opazovanih pod mikroskopom. Ker ta metoda šteje skupno število živih in mrtvih bakterij, se imenuje tudi metoda skupnega štetja bakterij.
Hemocitometer je običajno posebno stekelce s štirimi režami, ki tvorijo tri ploščadi. Srednja ploščad je razdeljena na dve polovici s kratkim vodoravnim utorom. Na vsaki strani ploščadi je vgravirana kvadratna mreža. Vsaka kvadratna mreža je razdeljena na devet velikih kvadratov. Velik kvadrat na sredini je soba za štetje. Štetje mikroorganizmov poteka v štetni komori. Struktura hemocitometra je prikazana na sliki Ⅷ-1.
Lestvica štetne komore ima na splošno dve specifikaciji. Eden je velik kvadrat, razdeljen na 16 srednjih kvadratov, vsak srednji kvadrat pa je razdeljen na 25 majhnih kvadratov (slika Ⅷ-2); drugi je velik kvadrat. Kvadratna mreža je razdeljena na 25 srednjih kvadratov, vsak srednji kvadrat pa je razdeljen na 16 majhnih kvadratov (slika VIII-1, C). Toda ne glede na vrsto štetne plošče je število majhnih kvadratov v vsakem velikem kvadratu enako, to je 16×25=400 majhnih kvadratov, kot je prikazano na sliki Ⅷ-2.
Stranska dolžina vsakega velikega kvadrata je 1 mm, torej je ploščina vsakega velikega kvadrata 1 mm2. Ko je pokrovno steklo pokrito, je višina med stekelcem in pokrovnim steklom 0.1 mm, tako da je prostornina števne komore 0.1 mm3.
Pri štetju običajno preštejte skupno število bakterij v petih srednjih kvadratih, nato poiščite povprečno vrednost vsakega srednjega kvadrata in nato pomnožite s 16 ali 25, da dobite skupno število bakterij v velikem kvadratu, nato pa izračunajte Pretvori v skupno število bakterij v 1 ml raztopine bakterij.
