Razlike med fluorescentno mikroskopijo in konfokalno mikroskopijo
Fluorescenčni mikroskop
1. fluorescenčni mikroskop uporablja ultravijolično svetlobo kot svetlobni vir za obsevanje predmeta, ki ga pregledajo, zaradi česar oddaja fluorescenco, nato pa opazuje obliko in položaj predmeta pod mikroskopom. Fluorescentna mikroskopija se uporablja za preučevanje absorpcije, transporta, distribucije in lokalizacije snovi znotraj celic. Nekatere snovi v celicah, kot je klorofil, lahko fluoressujejo, če so izpostavljene ultravijoličnemu sevanju; Obstaja tudi nekaj snovi, ki sami ne morejo oddajati fluorescence, lahko pa oddajajo tudi fluorescenco, če jih obarvate s fluorescentnimi barvili ali fluorescentnimi protitelesi in obsevamo z ultravijolično svetlobo. Fluorescentna mikroskopija je eno od orodij za kvalitativne in kvantitativne raziskave takšnih snovi.
2. načelo fluorescenčnega mikroskopa:
(A) Vir svetlobe: Vir svetlobe oddaja svetlobo različnih valovnih dolžin (od ultravijolične do infrardeče).
(B) Vir svetlobe vzbujevanja filtra: oddaja svetloba specifične valovne dolžine, ki lahko povzroči fluorescenco v vzorcu, hkrati pa blokira svetlobo, ki je neuporabna za vznemirljivo fluorescenco.
(C) Fluorescentni vzorci: običajno obarvani s fluorescentnimi pigmenti.
(D) Blokiranje filtra: selektivno prenaša fluorescenco z blokiranjem vzbujevalne svetlobe, ki je ne absorbira vzorec, in nekatere valovne dolžine v fluorescenci se tudi selektivno prenašajo. Mikroskop, ki uporablja ultravijolično svetlobo kot svetlobni vir, da osvetljeni predmet oddaja fluorescenco. Elektronski mikroskop sta prvič sestavila Knorr in Haruska v Berlinu v Nemčiji leta 1931. Ta mikroskop namesto svetlobnih žarkov uporablja hitrih elektronskih žarkov. Zaradi veliko krajše valovne dolžine elektronskega pretoka v primerjavi s svetlobnimi valovi lahko povečava elektronskega mikroskopa doseže 8 0 0000 krat, z minimalno mejo ločljivosti 0,2 nanometrov. Elektronski mikroskop za skeniranje, ki je bil prvič uporabljen leta 1963, omogoča ljudem, da vidijo drobne strukture na površini predmetov.
3. Obseg aplikacije: Uporablja se za povečanje slik majhnih predmetov. Na splošno se uporablja za opazovanja biologije, medicine, mikroskopskih delcev itd.
Konfokalni mikroskop
1. Konfokalni mikroskop doda odsevno polovično lečo na odsevno svetlobno pot, ki odbija odsevno svetlobo, ki je skozi lečo prešla v druge smeri. Na svoji žariščni točki je pregrada z luknjo, ki se nahaja na žariščni točki, za pregradom pa je fotomultiplikatorska cev. Lahko si predstavljamo, da odbojna svetloba pred in po fokusu svetlobe zaznavanja ni mogoče osredotočiti na majhno luknjo skozi ta konfokalni sistem in bo blokirana z napadom. Torej fotometer meri odsevno intenzivnost svetlobe na žarišču.
2. načelo: tradicionalni optični mikroskopi uporabljajo vire svetlobe polja, na sliko vsake točke na vzorcu pa vpliva difrakcija ali razpršena svetloba iz sosednjih točk; Konfokalni mikroskop z laserskim skeniranjem uporablja laserski žarek za osvetlitev luknje in tvori točkovni vir svetlobe, da skenira vsako točko na goriščni ravnini vzorca. Osvetljena točka na vzorcu se slika na luknji za odkrivanje in jo po zaznavanju luknje prejemamo točko ali črto s fotomultiplikatorjem (PMT) ali hladno sklopljeno napravo (CCCD), hitro tvori fluorescenčno sliko na zaslonu računalniškega monitorja. Osvetlitvena luknja in luknja za zaznavanje sta konjugata glede na goriščno ravnino objektivne leče. Točke na goriščni ravnini so hkrati osredotočene na osvetlitveno luknjo in natinček emisije, točke zunaj goriščne ravnine pa ne bodo slikane na luknji za odkrivanje. Nastala konfokalna slika je optični presek vzorca, ki premaga pomanjkljivost zamegljenih slik na splošnih mikroskopih.
