Razlika med fluorescenčnim mikroskopom in navadnim optičnim mikroskopom
Razlika med fluorescenčnim mikroskopom in običajnim optičnim mikroskopom, fluorescenčni mikroskop in navaden optični mikroskop sta različna, opazovanje vzorca ni z osvetlitvijo običajnega svetlobnega vira, temveč z uporabo določene valovne dolžine svetlobe (običajno ultravijolične, modro-vijolične) Vzbujanje vzorca pod mikroskopom znotraj fluorescentnega materiala, tako da oddaja fluorescenčno svetlobo, zato vloga fluorescenčnega mikroskopa v viru svetlobe ni neposredna osvetlitev, temveč kot nekakšna stimulacija fluorescence vzorca notranje svetlobe. Vir fluorescenčnega mikroskopa ni neposredna osvetlitev, temveč kot vir energije za stimulacijo fluorescenčne snovi v vzorcu. Razlog, zakaj lahko opazujemo vzorec, ni osvetlitev svetlobnega vira, ampak pojav fluorescence, ki ga predstavlja fluorescentna snov v preparatu po absorbciji vzbujene svetlobne energije. Vidimo lahko, da so značilnosti fluorescenčnega mikroskopa predvsem v tem, da lahko njegov svetlobni vir dovaja veliko število specifičnih valovnih dolžin vzbujevalne svetlobe, tako da lahko fluorescentne snovi v preiskovanem vzorcu pridobijo potrebno intenzivnost vzbujevalne svetlobe. Hkrati mora imeti fluorescenčni mikroskop ustrezen filtrirni sistem. Fluorescenčni mikroskop je osnovno orodje za **fluorescenčno histokemijo. Sestavljen je iz svetlobnega vira ultravisokega tlaka, filtrirnega sistema (vključno s filtrirno ploščo za vzbujanje in zatiranje), optičnega sistema in fotografskega sistema ter drugih glavnih komponent, je uporaba določene valovne dolžine svetlobe za spodbujanje vzorca k oddajanju fluorescence.
1. način vzbujanja fluorescence: glede na obseg valovne dolžine je svetloba razdeljena na metodo vzbujanja UV (z ultravijolično osvetlitvijo) in metodo vzbujanja BV (z modro vijolično svetlobo). Dve vrsti metode vzbujanja UV je krajša od 400 nm blizu ultravijolične svetlobe za vzbujanje. Pri tej metodi ni vidne vzbujalne svetlobe, zato opazovana fluorescenca kaže inherentno fluorescenco barvila in je enostavno razlikovati specifično fluorescenco na vzorcu od lastne fluorescence tkiva v ozadju.
2. Metoda vzbujanja BV: metoda je osredotočena na 404 nm, 434 nm od ultravijolične do modre svetlobe za vzbujanje. Ta metoda uporablja modro svetlobo za obsevanje vzorca, zato mora izklopni filter sistema za opazovanje fluorescence uporabljati filter, ki lahko popolnoma blokira modro svetlobo in popolnoma prepušča želeno zeleno in rumeno fluorescenco. Fluorescentni pigmenti za metodo fluorescentnih protiteles. Ker sta valovna dolžina največje absorpcije vzbujalne svetlobe in valovna dolžina največje emisije fluorescence blizu druga drugi, morajo biti filtri, ki se uporabljajo pri metodi vzbujanja BV, filtri z ostro mejo. Ta metoda uporablja modro svetlobo kot vzbujevalno svetlobo, zato je absorpcijska učinkovitost fluorokroma večja in je mogoče dobiti svetlejšo sliko. Pomanjkljivost je, da ni mogoče videti fluorescence pod 500 nm, nad 500 nm pa je celotna slika videti rumena. Pri metodi s fluorescenčnimi protitelesi se večina specifičnosti ocenjuje po barvi, ki je edinstvena za fluorokrom, zato so slabosti zgoraj opisane metode vzbujanja BV ponavadi izjemno vplivne pri razpravi o subtilni specifičnosti.
