Podrobno opišite korake izbire in metode fluorescentnih sond za konfokalno mikroskopijo
Pri poskusih s konfokalnimi mikroskopi je mogoče nekatere eksperimentalne indikatorje zaznati z uporabo avtofluorescence samega vzorca ali eksogenih snovi, vendar večina snovi, ki jih je treba testirati, nima merljive fluorescence in jih je treba označiti s fluorescentnimi sondami. Ima merljiv fluorescentni signal. Kako torej izbrati fluorescentne sonde za konfokalno mikroskopijo?
1. Določite indikatorje, ki jih želite testirati glede na namen poskusa
Ko je določen indeks detekcije, se določi tudi izbirno območje fluorescenčnih sond. Vidimo, da je izbira, katero fluorescentno sondo uporabiti v poskusu, odvisna od namena poskusa. Na primer, če je namen poskusa preučevanje sprememb kalcijevih ionov v kardiomiocitih, ko pride do atrijske fibrilacije, se lahko ugotovi, da so preskušana snov kalcijevi ioni v kardiomiocitih, izbor fluorescenčnih sond pa je omejen na sonde kalcijevih ionov, ki lahko označijo žive celice. Igla.
2. Določite obseg razpoložljivih fluorescentnih sond
Za nove eksperimentalne snovi ali indikatorje, če namen poskusa ni raziskovanje novih fluorescenčnih sond, se lahko odločite za uporabo zrelih sond in metod označevanja. Vrsto ali obseg fluorescentnih sond, ki lahko označijo snov, ki jo je treba testirati, je mogoče določiti z iskanjem po verodostojni literaturi ali katalogih izdelkov znanih podjetij z reagenti doma in v tujini.
3. Raziščite, ali značilnosti fluorescentne sonde izpolnjujejo zahteve za pripravo fluorescentnih vzorcev.
Lastnosti fluorescenčnih sond neposredno vplivajo na označevanje vzorcev in eksperimentalne rezultate. Zato je treba pred izbiro fluorescenčnih sond in označevanjem vzorcev v poskusu popolnoma razumeti njihove fluorescenčne značilnosti. Značilnosti fluorescentnih sond, ki jih je treba raziskati, vključujejo:
1. Reakcijske značilnosti svetlobnih sond in vzorcev
2. Občutljivost in intenziteta fluorescence fluorescentnih sond
3. Spektralne lastnosti vzorcev, označenih s fluorescentnimi sondami
4. Stabilnost fluorescence
5. Interakcija med večkratno fluorescenco v vzorcu
