Metode odpravljanja napak in koraki za fazno kontrastno mikroskopijo
a. Na podlagi prilagoditve sistema osvetlitve Kuhler uporabite metodo svetlega polja, da jasno izostrite vzorec;
b. Obrnite žaromet na Ph1 in ga poravnajte s črto lestvice na vrtljivem krožniku. Izberite objektiv z 10-kratnim faznim kontrastom in ga zamenjajte s prosojnim vzorcem, ki ga želite opazovati;
c. Odstranite enega od okularjev, zamenjajte ga s centrirnim teleskopom in izostrite dva kontrastna obroča v vidnem polju (črni kontrastni obroč objektiva in prepustni kontrastni obroč zbiralne leče);
d. Dva različna obroča v vidnem polju morda ne sovpadata. Prilagodite dve nastavitveni napravi na žarometu (nastavitev levega in desnega položaja diferencialnih obročev z nastavitvenimi palicami in tornimi gumbi za nastavitev sprednjega in zadnjega položaja), tako da se prozorni obroč premika naprej in nazaj, da sovpada s črnim obročem ;
e. Po nastavitvi preklopite nazaj na opazovalni okular in pritisnite zeleni filter v optično pot, da opazujete sliko fazne razlike vzorca;
f. Pri opazovanju z 20x in 40x objektivom naj bo reflektor nastavljen na položaj Ph2, pri uporabi 100x objektiva pa na položaj Ph3.
Področje uporabe: Primerno za opazovanje prozornih, neobarvanih ali neobarvanih vzorcev, kot so različne celice, živa tkiva, neobarvane ali neobarvane rezine tkiva, vodni organizmi itd.
Osnovni princip fazno kontrastnega mikroskopa
Ko svetloba prehaja skozi razmeroma prozoren vzorec, ni bistvene spremembe valovne dolžine (barve) in amplitude (svetlosti) svetlobe. Zato je pri opazovanju neobarvanih vzorcev (kot so žive celice) pod navadnim optičnim mikroskopom pogosto težko razlikovati njihovo morfologijo in notranjo strukturo. Vendar pa bodo zaradi razlik v lomnem količniku in debelini različnih delov celice pri prehodu skozi ta vzorec prisotne razlike v optični poti neposredne in uklonjene svetlobe. Ko se optična pot poveča ali zmanjša, se spremeni faza pospeševanja ali zaostajanja svetlobnih valov (posledično fazna razlika). Fazne razlike svetlobe s prostim očesom ni mogoče občutiti, lahko pa mikroskop s fazno razliko uporabi svojo posebno napravo - krožno odprtino in fazno ploščo ter s pomočjo interferenčnega pojava svetlobe pretvori fazno razliko svetlobe v amplitudno razliko. (razlika med svetlobo in temo), ki jo lahko zazna človeško oko. Zaradi tega izvirno prozoren predmet pokaže očitne svetlobne in temne razlike, poveča kontrast in nam omogoči jasno opazovanje živih celic in nekaterih finih struktur znotraj celic, ki jih ni mogoče videti ali jasno videti pod običajnimi optičnimi mikroskopi in mikroskopi s temnim poljem.
Načelo slikanja fazno kontrastnega mikroskopa: optični vir lahko prehaja le skozi prozoren obroč s krožno odprtino, ki se nato fokusira v žarek svetlobe. Ko gre ta žarek svetlobe skozi preizkušani predmet, je podvržen različnim stopnjam odstopanja (uklona) zaradi različnih optičnih poti vsakega dela. Zaradi dejstva, da slika, ki jo tvori prozorni obroč, sovpada s konjugirano površino na fazni plošči in goriščno ravnino za lečo objektiva. Neodklonska direktna svetloba torej prehaja skozi konjugirano površino, odklonjena uklonska svetloba pa skozi kompenzacijsko površino. Zaradi različnih lastnosti konjugirane površine in kompenzacijske površine na fazni plošči bosta ustvarili določeno fazno razliko in zmanjšanje intenzivnosti svetlobe, ki prehaja skozi ta dva dela. Dva sklopa svetlobe se bosta nato zbližala skozi zadnjo lečo in potovala po isti optični poti, kar bo povzročilo interferenco med direktno in uklonjeno svetlobo, pri čemer se bo fazna razlika spremenila v amplitudno razliko. Na ta način se med fazno kontrastno mikroskopijo fazna razlika, ki je človeško oko ne razloči, pretvori v amplitudno razliko (svetlostno razliko), ki jo človeško oko razloči skozi svetlobo brezbarvnega prozornega telesa.
