Primerjava med konfokalno mikroskopijo in konvencionalno optično mikroskopijo
Mikroskop je glavno orodje za opazovanje celic. Glede na različne vire svetlobe ga lahko razdelimo v dve kategoriji: optični mikroskopi in elektronski mikroskopi. Prvi kot vir svetlobe uporablja vidno svetlobo (ultravijolični mikroskop uporablja ultravijolično svetlobo), drugi pa elektronski žarek. Med optične mikroskope spadajo tako navadni optični mikroskopi kot laserski konfokalni mikroskopi.
Navaden optični mikroskop
Običajni biološki mikroskop je sestavljen iz treh delov, in sicer: ① sistem osvetlitve, vključno z virom svetlobe in kondenzatorjem; ② Optični ojačevalni sistem, sestavljen iz objektiva in okularja, je glavno telo mikroskopa. Da bi odpravili sferično in kromatsko aberacijo, sta tako okular kot objektiv sestavljena iz kompleksnih skupin leč. Mehanska naprava, ki se uporablja za pritrjevanje materialov in olajšanje opazovanja.
Jasnost mikroskopske slike ni odvisna le od njene povečave, ampak tudi od njene ločljivosti. Ločljivost se nanaša na sposobnost mikroskopa (ali človeškega očesa na razdalji 25 cm od tarče), da razlikuje predmete v majhnih intervalih. Velikost ločljivosti je odvisna od valovne dolžine svetlobe, indeksa zaslonke in lomnega količnika medija. Izražen je kot: R=0.61 λ/NANA=nsin /2, kjer je n=lomni količnik medija; =aperturni kot (kot, pod katerim vzorec odpre zaslonko objektiva), NA=numerična apertura. Ali je kot zrcala vedno manjši od 180?, torej mora biti največja vrednost zui za sina/2 manjša od 1.
Lomni količnik stekla, ki se uporablja pri izdelavi optičnih leč, je 1.65-1,78 in bližje kot je lomni količnik uporabljenega medija steklu, tem bolje. Za leče s suhim objektivom je medij zrak, razmerje zaslonke pa je običajno 0.05-0.95; Oljna leča kot medij uporablja olje cedre, razmerje zaslonke pa je lahko blizu 1,5.
Valovna dolžina navadne svetlobe je {{0}}nm, zato vrednost ločljivosti mikroskopa ne bo manjša od 0,2 μm, ločljivost človeškega očesa pa je 0,2 mm. Zato je največja povečava za oblikovanje mikroskopa običajno 1000X.
