Biomikroskopija glede volumna tkivnih blokov
Biološka mikroskopija Do sedaj so hladna fiksacija, zamrznjeni ultratanek rez in sušenje z zamrzovanjem rutinske metode za rentgenske mikroreze tkiv in celic. Podrobnosti te metode so razložene na naslednji način:
Pri bioloških mikroskopih s kondenzatorjem je mogoče kondenzor premikati gor in dol, da je svetlost zmerna, prav tako pa je mogoče spremeniti zaslonko spremenljive svetlobe, da dosežete zmerno svetlost 9b. Če je svetloba sončna, lahko kondenzor primerno dvignemo in zaslonko variabilnega svetlobnega vira primerno povečamo. Če je svetloba premočna, lahko zbiralno lečo ustrezno znižamo in ustrezno zmanjšamo zaslonko sekajoče se svetlobe. Če se v tem primeru še vedno počutite bleščeče, lahko izberete ustrezen filter in ga namestite na nosilec pod kondenzatorjem. Ta hrast bo lahko pridobil svetlost, ki vas bo zadovoljila. Seveda nastavitev zgornjega in spodnjega položaja kondenzorja, nastavitev velikosti zaslonke spremenljivega optičnega odčitka in izbira ustreznega filtra zahtevajo določeno obdobje prakse za pridobivanje izkušenj.
Zelo pomembno vprašanje v biološki mikroskopiji je, da se v procesu vzorčenja in ločevanja celic, po liofilizaciji in vdelavi smole (FD), po zamrznitvi ultratankih agregatov in po liofilizaciji vsebnost 65 elementov v vsakem delu je treba skrbno ravnati. Celic, ki jih je treba analizirati, ni mogoče poškodovati. Kajti mikroanaliza z rentgenskimi žarki ne vključuje samo številnih korakov, ampak tudi veliko stane. Če so analizirane celice poškodovane celice ali mrtve celice po dolgem času in večstopenjski obdelavi, je zelo obžalovanja vredno narediti napačne sklepe. Na primer, kardiomiociti, ločeni z obdelavo s kolagenazo, imajo dve obliki, ena je dolga palica
Biomikroskopija Količina in porazdelitev elektrolitov v teh dveh vrstah celic sta precej različni. V krožnih kardiomiocitih je Na zelo visok in K zelo nizek, v ogorčicah pa je koncentracija ca zelo visoka. Po preverjanju z drugimi analiznimi metodami je bilo dokazano, da sta visok Na in nizek K okroglih celic ter visok Ca v mitohondrijih posledica poškodbe celične membrane med procesom ločevanja celic. Metoda ledeno mrzle fiksacije celic in tkiv je običajno, da najprej uporabimo gašenje in fiksacijo, nato pa jih shranimo v tekoči dušik. Za učinek konzerviranja je zelo pomembna kalilna fiksacija. Žive celice ali sveža tkiva so bogata z vodo. Pri kaljenju se deli celic ali tkiv, ki so v neposrednem stiku z zdrobljenim hladilnim sredstvom (predvsem pri kaljenju s tekočim dušikom), najprej najprej zamrznejo in fiksirajo ter tako tvorijo »lupino«, ki ovira osrednje dele celic. zdrobljen in hladno fiksiran. Zato se pri analizi mikroobmočij X-linije pogosto ugotovi, da so v središču večjih celic ledeni kristali. Da bi preprečili, da bi se to zgodilo, se kot pokvarjeno hladilno sredstvo uporabi snov s tališčem, ki je višje od tališča tekočega dušika, vendar nižje od tališča 806c. Takšnih snovi je veliko, najlažje, najcenejši pa je koncentrirani propan (vrelišče - 42.120c, tališče - 187.10c, molekulska masa 44,1), hitrost ohlajanja pa najvišja. . Toda njegova pomanjkljivost je, da je vnetljiv.
Biološki mikroskop lahko mišično vlakno postavi na posebno stojalo, tako da, ko krčenje mišičnega vlakna doseže določeno fazo in ga je treba popraviti, nemudoma zažene šoba za pršenje tekočega propana na mišično vlakno, da ga pogasi in popravi. Nato smo mišična vlakna skupaj z okvirjem vzeli ven in dali v tekoči dušik. Če fiksirate krvne celice ali izolirane celice, celice najprej koncentrirajte s centrifugiranjem pri nizki hitrosti, celice prenesite v srebrno vialo z dobro toplotno prevodnostjo, vialo postavite v tekoči propan in zamrznite za fiksacijo. Pri fiksiranju podganje trebušne slinavke v Hallovem laboratoriju sta bila dva jeklena bloka predhodno ohlajena s tekočim helijem (ali tekočim dušikom), dva bakrena bloka pa sta bila vpeta s kleščami in nameščena na sprednji in zadnji del trebušne slinavke, da se ohladita in pritrdita. trebušna slinavka. Tkiva ali celice lahko po kaljenju in fiksiranju shranite v tekočem dušiku za dolgoročno shranjevanje.
Biološka mikroskopija Poleg trenutno najbolj cenjene metode zamrznjenih ultratankih rezov je tukaj še ena tehnika nanašanja, ki jo uporabljajo znanstveniki. Doda se snov, da se tvori usedlina s komponento, ki jo je treba analizirati, da se imobilizira pred analizo, nato pa se usedlina analizira. Na primer, ljudje pogosto uporabljajo oksalat in piroantimonat za odlaganje ca v mišičnih celicah. Prvi ni dovolj občutljiv na nizko koncentracijo Ca v citoplazmi; piroantimonat je bolj občutljiv in lahko tvori elektronsko gosto usedlino s prostim Ca v možganih, vendar piroantimonat ni združljiv z natrijem, manganom, barijem, železom Nastajajo tudi usedline in so manj specifične. Postopek priprave vzorca je podoben pripravi vzorcev ultratankih rezov z običajnim transmisijskim elektronskim mikroskopom, razlika je v tem, da je bil 3-odstotni kalijev piroantimonat (fosfatni pufer, pH 7,6) fiksiran 6 ur pred fiksacijo, na obarvanih ultratankih rezih mišic pa V srednjih črtah pasov A in 2 vsakega sarkomera so bile vidne črne usedline, za rentgensko mikroanalizo pa so bili uporabljeni neobarvani odseki. Diaminobenzidin tetrahidroklorid (DAB) je bil uporabljen za obarjanje snovi, ki vsebujejo hem in tako naprej. Kombinacijo reakcije histokemične precipitacije in rentgenskega mikrodiferenciacijskega mostu je mogoče upoštevati v laboratorijih, ki nimajo zamrznjenih ultratankih rezov. Polkvantitativno je mogoče narediti glede na višino vrha elementov, ki jih je treba analizirati
