Prednosti in slabosti večfotonske laserske vrstične mikroskopije (MLSM)
Večfotonska laserska vrstična mikroskopija je eksperimentalna metoda, ki temelji na tehnologiji laserske vrstične mikroskopije, ki zagotavlja boljše optične zmožnosti rezanja za tridimenzionalno opazovanje. Metoda večfotonskega fluorescenčnega vzbujanja uporablja dolgovalovno rdečo svetlobo ali bližnjo infrardečo svetlobo za zbiranje fluorescenčnih slik osebkov z visoko ločljivostjo, kar povzroči minimalno škodo na živih osebkih. Zato je primeren za slikanje živih celic, zlasti debelih živih tkiv, kot so rezine možganov, zarodki itd. Slikovne študije celih organov ali celo teles.
Prednosti so naslednje:
1. Za vzbujanje uporabite rdečo svetlobo ali infrardečo svetlobo, sipanje svetlobe pa je majhno (sipanje majhnih delcev je obratno sorazmerno s četrto močjo valovne dolžine).
2. Luknjica ni potrebna in zberemo lahko več razpršenih fotonov iz slikovnega preseka.
3. Luknjica ne more razlikovati razpršenih fotonov, oddanih iz defokusiranega območja ali območja izostritve, razmerje med signalom in šumom večfotonskega slikanja v globokih plasteh pa je dobro.
4. Ultravijolično ali vidno svetlobo, ki se uporablja za enofotonsko vzbujanje, vzorec zlahka absorbira in oslabi, preden žarek doseže goriščno ravnino, in je težko vzbujati globoke plasti.
5. V smislu opazovanja z biološkim mikroskopom je prvi pomislek, da ne poškodujemo aktivnega stanja samega organizma in da ohranimo pretok vode, koncentracijo ionov, kisika in hranil. V primeru opazovanja svetlobe morata tako toplota kot fotonska energija ostati znotraj količine sevanja in svetlobne energije, da se celice ne poškodujejo.
6. Večfotonska mikroskopija ima tudi veliko prednosti. Na primer, kar zadeva tridimenzionalno ločljivost, globinsko prodiranje, učinkovitost razprševanja, svetlobo ozadja, razmerje med signalom in šumom, nadzor itd., obstajajo transcendentne značilnosti, ki jih prejšnji laserski mikroskopi niso imeli ali se jim niso mogli ujemati.
Večfotonska konfokalna laserska vrstična mikroskopija je bila razširjena na različna raziskovalna in uporabna področja. Izvaja lahko tridimenzionalno nedestruktivno opazovanje vzorcev v njihovem naravnem stanju ter lahko izboljša ločljivost in razmerje med signalom in šumom sistema. Uporaba materialov za večfotonsko vzbujanje. Spremembe lastnosti lahko uresničijo tudi tridimenzionalno shranjevanje podatkov o višini in tridimenzionalno mikro strojno obdelavo v kateri koli smeri, kar ima visoko vrednost uporabe. Verjame se, da bo z nadaljnjim razvojem strojev, materialov, laserske tehnologije itd., povezanih z večfotonsko konfokalno mikroskopijo, bolj fotonska konfokalna laserska vrstična mikroskopija deležna večjega razvoja in širše uporabe.
Slabosti so naslednje:
1. Lahko samo slika fluorescenco.
2. Če vzorec vsebuje kromoforje, ki lahko absorbirajo vzbujevalno svetlobo, kot so pigmenti, lahko vzorec poškoduje vročina.
3. Ločljivost je rahlo zmanjšana. Čeprav ga je mogoče izboljšati s sočasno uporabo konfokalnih lukenj, bo prišlo do izgube signala.
4. Stroški večfotonskih skenirnih mikroskopov so omejeni z dragimi ultrahitrimi laserji in so relativno visoki.
