Napredne prednosti večfotonskih mikroskopov z laserskim skeniranjem
Laserski vrstični večfotonski mikroskop je pomembna izboljšava optične mikroskopije, ki se kaže predvsem v zmožnosti opazovanja globokih struktur živih celic, fiksnih celic in tkiv ter pridobivanja jasnih in ostrih več{0}}plastnih Z-ravninskih struktur, namreč optičnih rezin, ki jih je mogoče uporabiti za konstruiranje tri-dimenzionalnih trdnih struktur vzorcev. Konfokalni mikroskop uporablja vir laserske svetlobe, ki se razširi, da zapolni celotno goriščno ravnino leče objektiva, nato pa konvergira v zelo majhne točke na goriščni ravnini vzorca skozi sistem leč objektiva. Glede na numerično odprtino leče objektiva je premer najsvetlejše svetlobne točke približno 0,25-0,8 μm, globina pa približno 0,5-1,5 μm. Velikost konfokalne točke določajo zasnova mikroskopa, valovna dolžina laserja, značilnosti objektiva, nastavitve stanja enote za skeniranje in lastnosti vzorca. Obseg osvetlitve in globinsko polje mikroskopa sta velika, medtem ko je osvetlitev konfokalnega mikroskopa fokusirana na varno gorišče na goriščni ravnini. Najosnovnejša prednost konfokalne mikroskopije je, da lahko izvede fino optično rezanje na debelih fluorescenčnih vzorcih (do 50 μm ali več) z debelino približno 0,5 do 1,5 μm. Serijo slik optičnih rezin lahko dobite s premikanjem vzorca navzgor in navzdol z uporabo koračnega motorja mikroskopa z osjo Z-. Zbiranje slikovnih informacij je nadzorovano znotraj varne ravnine in ga ne bodo motili signali, oddani z drugih lokacij na vzorcu. Po odstranitvi vpliva fluorescence ozadja in povečanju razmerja med signalom in šumom sta kontrast in ločljivost konfokalnih slik bistveno izboljšana v primerjavi s fluorescenčnimi slikami s tradicionalno poljsko osvetlitvijo. V mnogih vzorcih se zapletene strukturne komponente prepletajo in tvorijo zapletene sisteme, toda ko je mogoče zbrati dovolj optičnih odsekov, jih lahko s programsko opremo rekonstruiramo v treh dimenzijah. Ta eksperimentalna metoda se pogosto uporablja v bioloških raziskavah za pojasnitev kompleksnih strukturnih in funkcionalnih odnosov med celicami ali tkivi.
