Prilagoditev sistema slikovne optične poti svetlobnega mikroskopa in oris mikroskopske preiskave
Prilagoditev sistema slikovne optične poti in oris mikroskopskega pregleda
Prilagoditev slikovnega optičnega sistema mikroskopa se izvaja glede na potrebe različnih mikroskopskih tehnik. Tako imenovana mikroskopija je na kratko metoda osvetljevanja pri opazovanju vzorca skozi mikroskop ter tehnika in način doseganja boljšega kontrasta v sliki, ki jo tvori vzorec. V nadaljevanju je na kratko opisano, kako je mikroskopija dozorela v več metodah in ustrezni metodi prilagoditve optičnega sistema za slikanje mikroskopa.
1. Prenosno svetlo polje:
To je najbolj tradicionalna in pogosta metoda uporabe od izuma mikroskopa. Osnovne komponente: a. Objektiv: za opazovanje v svetlem polju se lahko uporablja katera koli objektivna leča; b. Optični daljnogled: uporabite lahko vse vrste spektivov, po možnosti opremljenih z zaslonko. Metoda prilagajanja: po prilagoditvi Kuhlerjevega osvetlitvenega sistema zgornjega mikroskopa je mogoče uporabiti metodo svetlega polja. Področje uporabe: vsi obarvani deli tkiva, razmazi krvi itd. Varnostni ukrepi: a. Pri uporabi metode opazovanja svetlega polja je treba prilagoditi Kuhlerjev sistem osvetlitve; b. Diafragma vidnega polja ne sme biti poljubno odprta, sprednja leča zbiralnega zrcala pa mora biti postavljena dejansko navzven in v optično pot, kadar uporabljate leče objektiva 10 ×, manj kot 10 × in več kot 10. ×; c. Aperturne diafragme zbiralnega zrcala se ne sme uporabljati za prilagajanje svetlosti vidnega polja in višine zbiralnega zrcala ne smete prilagajati brez razlikovanja, saj se bo ločljivost mikroskopa zmanjšala in ločljivost obarvanega tkiva bo poškodovan. ločljivost mikroskopa in poškodbe je prilagojena Kuhlerjevemu osvetljevalnemu sistemu; d. pri mikrofotografijah morate ob vsaki spremembi uporabe povečave leče objektiva prilagoditi diafragmo zaslonke zbiralne leče, tako da je njena velikost popolnoma enaka numerični odprtini, ki se uporablja v leči objektiva 2/3.
2. Metoda faznega kontrasta prepuščene svetlobe:
To je sodobna mikroskopska preiskava metode za povečanje kontrasta. Osnovni sestavni deli: fazno kontrastna leča objektiva, svetlo vidno polje in fazno kontrastni večnamenski zorni daljnogled, fokusni teleskop, zeleni filtri.
Metode prilagajanja:
a. Na podlagi prilagoditve Kuhlerjevega osvetlitvenega sistema jasno izostrite vzorec z metodo svetlega polja
b. Obrnite zorni daljnogled na Ph1, da poravnate položaj skale na številčnici, izberite lečo objektiva s faznim kontrastom 10 × in zamenjajte prozorni vzorec, ki ga želite opazovati.
c. Odklopite enega od okularjev, ga zamenjajte s centriranim teleskopom in se osredotočite na dva fazna kontrastna obroča v vidnem polju (črni fazni kontrastni obroč leče objektiva in fazni kontrastni obroč za prepustnost svetlobe zbiralne leče).
d. Oba obroča za fazni kontrast v vidnem polju morda ne sovpadata, prilagodite obe nastavitvi na spektilu (nastavitev levega in desnega položaja ročice za nastavitev faznega kontrastnega obroča ter prilagoditev sprednjega in zadnjega položaja tornega gumba) , tako da obroč za prepustnost svetlobe spredaj in zadaj na desno in levo sovpada s črnim obročem
e. Po nastavitvi se vrnite na okular za opazovanje in pritisnite zeleni filter v optično pot, da opazujete fazno kontrastno sliko vzorca.
f. Kadar so za opazovanje na voljo objektivi 20× in 40×, je treba zorno lečo nastaviti na položaj Ph2, pri uporabi 100 objektivov pa je treba zorno lečo nastaviti na položaj Ph3.
Področje uporabe: Primeren je za opazovanje prozornih, neobarvanih ali neobarvanih vzorcev, kot so vse vrste celic, živa tkiva, neobarvani ali neobarvani deli tkiva, vodni organizmi itd.
3. Diferencialna interferenčna metoda faznega kontrasta:
Da bi premagali metodo faznega kontrasta opazovanja podrobnosti vzorca okoli slike, ki jo spremlja halo, bodo prikrili podrobnosti, ki bi jih morali videti, pa tudi vzorci ali deli tkiva zahtevajo precej tanko debelino, načeloma lahko biti debelejši od 10 µm in druge omejitve, uporaba načela dvožarkovne interference za načrtovanje subdiferencialne interferenčne metode faznega kontrasta.
Metode prilagajanja:
a. Metoda DIC mora biti prilagojena na podlagi tega, da je sistem Kulemin že prilagojen
b. Z uporabo objektiva 10× določite položaj ostrenja objektiva, ki lahko jasno vidi vzorec s svetlim vidnim poljem.
c. Polarizator postavite na svetlobno pot, pri tem pa upoštevajte, da mora biti usmerjen v smeri vzhod-zahod.
d. Obrnite vrtljivi gumb kondenzorja v položaj, ki ustreza uporabi leče objektiva 10 ×, tj. DIC 0.3-0.4.
e. Vstavite drsnik DIC za objektiv 10× na zadnjo stran objektiva ali na pretvornik objektiva.
f. Vstavite analizator v slikovno optično pot in upoštevajte, da mora biti njegova usmerjenost jug-sever.
g. Zamenjajte prozorni vzorec, ki ga želite opazovati, vklopite vir svetlobe, da jasno izostrite vzorec.
h. Prilagodite vložek DIC tako, da diferencialna interferenčna kontrastna slika doseže najboljši učinek, to je najočitnejši reliefni učinek.
jaz. Hkrati prilagodite zaslonsko zaslonko zbiralnega zrcala, da bo tudi učinek kontrasta optimalen.
j. Nato natančno prilagodite podrobnosti vzorca, da vidite strukturo vzorca na različnih ravneh.
k. Če vstavite komplementarno barvo (rdeča retardacijska plošča prvega reda) in hkrati prilagodite vložek DIC, lahko v vidnem polju vidite nenehno spreminjajoče se svetleče barve, z rdečo, oranžno, rumeno, zeleno, modro, vijolična, roza, roza-vijolična in zlato-rumena. Področje uporabe: prozorni ali neobarvani odseki tkiva, debeline do približno 100 µm, živo tkivo in žive celice v kulturi, majhni živi organizmi itd.
